?抗污染抗生素
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如何避免細(xì)胞污染?
1?進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)確保處于無(wú)菌環(huán)境,并使用恰當(dāng)?shù)臏缇夹g(shù)。
2?細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中所使用的培養(yǎng)基或添加的培養(yǎng)物均要確保無(wú)菌無(wú)污染。
3?定期使用顯微鏡或檢測(cè)試劑盒監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基,以確保無(wú)微生物污染。
4?使用抗污染抗生素。在原代細(xì)胞培養(yǎng)或克隆過(guò)程中微生物污染是難以發(fā)現(xiàn)的,Invivogen公司為此設(shè)計(jì)了具有預(yù)防功能的防污染試劑。Invivogen公司可提供的抗污染抗生素有Plasmocin? prophylactic,Normocin?,?Primocin??及Fungin?。
如何鑒別細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被哪種微生物污染?
如果細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中存在細(xì)菌和/或真菌污染,可以使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行鑒別。因?yàn)樗鼈兊纳L(zhǎng)速度很快,可以使細(xì)胞培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或菌斑,一般48小時(shí)后即可用肉眼檢測(cè)。隨后可使用檢測(cè)試劑盒對(duì)這些微生物種類進(jìn)行鑒定。然而,支原體污染不能直接用肉眼觀察,也不能通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行鑒別,只能通過(guò)特有的分析方法(如支原體檢測(cè)試劑盒)進(jìn)行檢測(cè)。因此,在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中支原體污染很容易被忽視。Invivogen提供的PlasmoTest?支原體污染檢測(cè)試劑盒結(jié)果可靠,分析準(zhǔn)確,尤其是可以排除假陽(yáng)性或不確定的結(jié)果。
針對(duì)不同微生物的污染,應(yīng)如何選擇Invivogen的抗污染抗生素?
應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱 | 支原體 | 細(xì)菌 | 酵母 | 真菌 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
預(yù)防 | Plasmocin??prophylactic | √ | * |
|
| 25mg(10×1 ml) | ant-mpp |
Normocin? | √ | √ | √ | √ | 500 mg(10×1 ml) | ant-nr-1 |
Primocin? | √ | √ | √ | √ | 500 mg(10×1 ml) | ant-pm-1 |
Fungin? |
|
| √ | √ | 75 mg(5×1.5 ml vails) | ant-fn-1 |
檢測(cè) | PlasmoTest? | √ | √ |
|
| 1 kit(250 samples) | rep-pt1 |
清除 | Plasmocin? Treatment | √ | * |
|
| 500 mg(2×1 ml) | ant-mpt |
Plasmocure? | √ | * |
|
| 100 mg(1 ml) | ant-pc |
Normocure? |
| √ |
|
| 100 mg(2×1 ml) | ant-noc |
Fungin? |
|
| √ | √ | 75 mg(5×1.5 ml vails) | ant-fn-1 |
在凍存細(xì)胞之前的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,可以添加抗污染抗生素嗎?
可以的,在凍存細(xì)胞之前可以添加Plasmocin??prophylactic(預(yù)防支原體污染試劑)或廣譜抗生素Normocin?。但是,在這之前需使用光學(xué)顯微鏡鑒定細(xì)胞是否被細(xì)菌或真菌污染,或使用PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)是否存在支原體污染。
Invivogen是否可以提供一種可以同時(shí)抵抗細(xì)菌、真菌、支原體污染的抗生素嗎?
Normocin?和Primocin?這兩款抗生素是廣譜性的,可同時(shí)抵御細(xì)菌、真菌、支原體的污染。兩者的區(qū)別是Primocin?推薦用于原代細(xì)胞培養(yǎng)中預(yù)防微生物的污染,而Normocin?則推薦用于細(xì)胞系培養(yǎng)。
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可以同時(shí)使用Invivogen的抗污染抗生素及基因篩選抗生素嗎?抗污染抗生素會(huì)影響基因篩選抗生素的作用效果嗎?
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可同時(shí)使用Invivogen的抗污染抗生素及基因篩選抗生素,抗污染抗生素的使用不會(huì)干擾常用的基因篩選抗生素的作用效果,例如G418, Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B和?Zeocin?。
?細(xì)菌污染
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)如何鑒別細(xì)菌污染?
由于細(xì)菌比真核細(xì)胞小很多,因此在細(xì)菌污染的早期階段通常被認(rèn)為是細(xì)胞碎片。這個(gè)時(shí)候應(yīng)使用放大倍數(shù)為100×-400×的光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞培養(yǎng)基的狀態(tài)。如果觀察到黑色斑點(diǎn)、桿狀物或螺旋狀物,那培養(yǎng)基應(yīng)該是被細(xì)菌污染了。由于細(xì)菌生長(zhǎng)快速,在污染后的48小時(shí)內(nèi)便可引起培養(yǎng)基的變化,使培養(yǎng)基變渾濁。若培養(yǎng)基中含有酚紅,由于細(xì)菌的新陳代謝使培養(yǎng)基的pH下降,從而導(dǎo)致培養(yǎng)基的顏色迅速變?yōu)辄S色。因此在細(xì)菌污染48小時(shí)之后,便可用肉眼直接觀察。微生物污染后的細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)該棄去,但如果沒(méi)有其他替代的培養(yǎng)基可用,則可使用Invivogen的Plasmocin? Treatment, Normocure?或者?Plasmocure?污染物清除試劑。
當(dāng)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不確定具體是哪種細(xì)菌污染細(xì)胞時(shí),應(yīng)該選擇哪種抗污染抗生素?
當(dāng)不確定細(xì)胞是被哪種細(xì)菌污染時(shí),推薦使用對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌均有效,具有光譜抗性的Normocure?。目前的研究結(jié)果表明,Normocure?可有效預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)菌污染,例如葡萄球菌、無(wú)色桿菌。
?真菌污染
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)如何鑒別真菌污染?
由于真菌菌絲可用肉眼或光學(xué)顯微鏡觀察,因此真菌污染細(xì)胞培養(yǎng)基之后可直接通過(guò)肉眼或者光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。酵母(30-10 um)是形態(tài)結(jié)構(gòu)最小的真菌,在光學(xué)顯微鏡下便可被觀察到。另外,真菌的生長(zhǎng)繁殖會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基中pH值增加,從而使含酚紅的培養(yǎng)基呈粉色。在大量真菌污染物存在的情況下,菌落可能形成霉菌,漂浮在培養(yǎng)基表面。此時(shí)應(yīng)立即丟棄培養(yǎng)基,以防孢子傳播。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為預(yù)防或清除真菌污染,F(xiàn)ungin?可以與青霉素、鏈霉素(Pen-Strep)同時(shí)使用嗎?
可以的,Fungin?可以與一般的抗生素如青霉素、鏈霉素一起使用。
Fungin?可以在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(MacConkey Agar)和血平板培養(yǎng)基中使用嗎??
可以的,Fungin?可以在其他培養(yǎng)基,如麥康凱瓊脂培養(yǎng)基(MacConkey Agar)和血平板培養(yǎng)基中使用。
已經(jīng)使用Fungin?處理了7天,但不確定真菌污染是否已全部被清除,對(duì)于這個(gè)問(wèn)題有什么建議嗎?
Invivogen建議將培養(yǎng)基分成兩份,一份繼續(xù)使用Fungin?繼續(xù)處理3-4天,另外一份中加入無(wú)Fungin?或青霉素-鏈霉素的新鮮培養(yǎng)基,之后取1 mL至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中,將培養(yǎng)皿置于20-25℃ 3-5天。此方法可以幫您確認(rèn)培養(yǎng)基中的真菌污染物是否已全部被清除。
推薦使用什么濃度的Fungin?處理細(xì)胞?
說(shuō)明書(shū)中推薦使用50 ug/mL的Fungin?處理細(xì)胞,但I(xiàn)nvivogen建議同時(shí)做75 ug/mL的平行處理組,以估計(jì)去除真菌污染的最佳使用劑量。處理時(shí)間應(yīng)持續(xù)5-10天。
?支原體污染
如何使用Invivogen的支原體檢測(cè)試劑盒Plasmo TestTM檢測(cè)支原體?
PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒是一種基于細(xì)胞的比色分析方法,利用Toll樣受體II可以識(shí)別支原體成分(脂肽)的能力,誘導(dǎo)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致NF-κB和其他轉(zhuǎn)錄因子的激活。在支原體存在的情況下,HEK-Blue?-2細(xì)胞表面表達(dá)的TLR2會(huì)激活這些轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)而誘導(dǎo)分泌sAP(分泌性堿性磷酸酶)報(bào)告蛋白,可在16 - 24小時(shí)內(nèi)被HEK-Blue?檢測(cè)培養(yǎng)基檢測(cè)到。
Invivogen的支原體檢測(cè)試劑盒Plasmo TestTM只能檢測(cè)活的支原體嗎?
PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒是通過(guò)檢測(cè)支原體脂蛋白來(lái)判斷是否有支原體存在的,因此其既可以檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的活的支原體,也可以檢測(cè)死的支原體。
另外,Invivogen的PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒不僅可以檢測(cè)支原體的脂蛋白,也可以檢測(cè)細(xì)菌的脂蛋白。但是由于細(xì)菌污染可直接通過(guò)觀察細(xì)胞培養(yǎng)基的狀態(tài)進(jìn)行鑒定,因此,當(dāng)PlasmoTest?檢測(cè)試劑盒結(jié)果呈現(xiàn)陽(yáng)性,且細(xì)胞培養(yǎng)基無(wú)渾濁、顏色無(wú)變化時(shí),可以斷定培養(yǎng)基受到了支原體污染。
Invivogen的支原體檢測(cè)試劑盒Plasmo TestTM與其他支原體檢測(cè)試劑盒相比,有什么優(yōu)勢(shì)嗎?
PlasmoTestTM是首款基于細(xì)胞分析原理檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中支原體污染的試劑盒,操作者只需具有基本的細(xì)胞培養(yǎng)的知識(shí)即可進(jìn)行操作。試劑盒在過(guò)夜孵育之后,一小時(shí)之內(nèi)即可獲得檢測(cè)結(jié)果。以往常用的支原體檢測(cè)方法是PCR,但這種檢測(cè)方法具有明顯的缺陷,例如假陰性結(jié)果且能夠檢測(cè)的支原體種類受引物限制,無(wú)法對(duì)全部支原體進(jìn)行檢測(cè)。最重要的是,Plasmo TestTM檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性時(shí),即表明細(xì)胞培養(yǎng)基中存在支原體污染物,因此不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。
在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中使用哪種試劑來(lái)預(yù)防支原體污染?使用那種試劑清除已污染的支原體?
●?Plasmocin??prophylactic(支原體預(yù)防試劑)是專門(mén)用于預(yù)防支原體污染的,它含有兩種有效的殺菌成分,作用于蛋白質(zhì)合成和DNA復(fù)制。
●?Plasmocin??treatment(支原體清除試劑),可在2 - 3周內(nèi)快速有效地消除支原體污染。如果2-3周之后使用Plasmocin?支原體清除試劑之后無(wú)法有效清除支原體污染,或支原體對(duì)Plasmocin?產(chǎn)生了耐藥性,可使用●?Plasmocure?。Plasmocin??treatment和Plasmocure?均是由兩種不同抗生素混合而成,通過(guò)不同的機(jī)制發(fā)揮作用,可使支原體在2 - 3周內(nèi)徹底清除。
在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),可以直接使用Plasmocure?代替Plasmocin??treatment清除已污染的支原體嗎?
Plasmocin??treatment和?Plasmocure?均是混合抗生素,用于清除已污染支原體。然而,Invivogen推薦只有在支原體對(duì)Plasmocin??treatment產(chǎn)生抗性的情況下才可使用Plasmocure?。
如果支原體對(duì)Plasmocure?、Plasmocin??treatment均已產(chǎn)生抗性,應(yīng)該怎么辦呢?
如果使用Plasmocure?、Plasmocin??treatment均無(wú)法有效清除細(xì)胞中的支原體污染物,則表明樣本中的支原體污染非常嚴(yán)重。這種情況下最好的辦法是在下一次傳代時(shí)盡可能稀釋您的細(xì)胞,以此來(lái)稀釋細(xì)胞中的支原體污染物。之后使用不同濃度(確保對(duì)細(xì)胞不會(huì)有太大毒性的濃度)的Plasmocure?再次處理細(xì)胞2周,例如使用工作濃度為50 ug/mL和100 ug/mL的Plasmocure?處理細(xì)胞。處理2周之后,將細(xì)胞分成兩份,一份使用Plasmocure?繼續(xù)處理一周,另一份不添加任何抗生素,3天后使用PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)污染情況,以避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如果您的細(xì)胞仍存在支原體污染,請(qǐng)重復(fù)以上步驟。
以上的操作步驟可有效清除90%的支原體污染,若您樣本中的支原體污染物未得到有效清除,請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們。
Plasmocin??treatment支原體清除試劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)的支原體污染有效嗎?
Plasmocin??treatment對(duì)胞內(nèi)、胞外的支原體污染均有效。
我通常在T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中清除支原體污染,如果換用6孔板的話,清除效果會(huì)更好嗎?
在T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中清除支原體污染物是合適的。當(dāng)細(xì)胞的匯合度在60-70%及處于傳代時(shí)期時(shí),支原體的清除效果最佳,因?yàn)檫@可以確保不斷去除支原體及添加新鮮的Plasmocin??treatment或?Plasmocure?支原體清除試劑。
使用Plasmocin??treatment處理細(xì)胞之后,取細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行PCR檢測(cè),結(jié)果顯示支原體污染呈陰性,但幾周之后細(xì)胞再次受到了支原體污染應(yīng)如何處理?
非常抱歉,這種情況應(yīng)該是使用Plasmocin??treatment期間并未完全清除您樣本中的支原體污染物。為防止這種情況再次發(fā)生,Invivogen建議在使用Plasmocin??treatment處理2周之后,將細(xì)胞培養(yǎng)基分成兩份。一份繼續(xù)使用Plasmocin??treatment繼續(xù)處理1周,以防處理兩周后細(xì)胞培養(yǎng)基中仍存在微量支原體污染物而發(fā)生再次污染的情況。另一份使用不含任何抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,3天之后進(jìn)行支原體檢測(cè),以檢測(cè)使用Plasmocin??treatment處理2周之后細(xì)胞培養(yǎng)基中的支原體殘留量。
Plasmocin??treatment是否適用于清除昆蟲(chóng)細(xì)胞內(nèi)的支原體污染?
Plasmocin??treatment適用于清除sf9細(xì)胞的內(nèi)的支原體污染,因此應(yīng)該同樣適用于其他昆蟲(chóng)細(xì)胞,但是invivogen無(wú)將Plasmocin??treatment用于昆蟲(chóng)細(xì)胞的案例及數(shù)據(jù)。
無(wú)菌污染-內(nèi)毒素污染
什么是無(wú)菌污染?這會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成什么問(wèn)題?
無(wú)菌污染物存在于無(wú)菌但仍有可能含有細(xì)菌成分的溶液和試劑中。內(nèi)毒素也被稱為脂多糖(LPS)或脂聚糖,是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分。內(nèi)毒素在體內(nèi)、體外均是有效的驗(yàn)證誘導(dǎo)劑。內(nèi)毒素污染是細(xì)胞培養(yǎng)和藥物生產(chǎn)中的主要問(wèn)題。因此,需格外注意無(wú)菌溶液和試劑的使用,檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)試劑中的內(nèi)毒素水平是非常重要的。有關(guān)內(nèi)毒素污染的更多信息,請(qǐng)查看細(xì)胞培養(yǎng)污染指南。
內(nèi)毒素污染的常見(jiàn)來(lái)源有哪些?
內(nèi)毒素的來(lái)源包括培養(yǎng)基、血清、水、緩沖液和其他細(xì)胞培養(yǎng)試劑,如胰蛋白酶。為了避免內(nèi)毒素污染,我們建議要求制造商提供內(nèi)毒素水平認(rèn)證,或在使用這些試劑之前,使用Invivogen的HEK-BlueTM?脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2進(jìn)行內(nèi)毒素水平檢測(cè)。
Invivogen的?HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒如何檢測(cè)脂多糖(LPS)?
HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2是一款基于細(xì)胞分析的比色試劑盒,專門(mén)用于檢測(cè)具有生物活性的內(nèi)毒素,可檢測(cè)低至0.01 EU/mL的微量脂多糖(LPS),其檢測(cè)原理是基于TLR4可識(shí)別革蘭氏陰性菌結(jié)構(gòu)上不同LPS的能力。微量(<0.01 EU/mL)脂多糖(LPS)的存在即可導(dǎo)致NF-κB的激活和分泌型堿性磷酸酶(SEAP)的產(chǎn)生。使用HEK-BlueTM進(jìn)行檢測(cè)時(shí),NF-κB激活可以用肉眼觀察或通過(guò)讀取OD650進(jìn)行定量。
您可以在以下文件中找到更多細(xì)節(jié):細(xì)胞培養(yǎng)污染指南。
HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2總共可以進(jìn)行多少次實(shí)驗(yàn)?
HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2提供了1 mL的QB試劑和1 mL的QB緩沖液,這足夠制備100 mL的分泌型堿性磷酸酶檢測(cè)試劑-QUANTI-Blue?溶液,可供大約供5個(gè)96孔板(480孔)進(jìn)行分析。
HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2的敏感性如何?
HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2是高敏檢測(cè)試劑盒,可以檢測(cè)低至0.01 EU/mL的內(nèi)毒素。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果要使用HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2檢測(cè)內(nèi)毒素污染狀況,是否可以使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,如果可以,胎牛血清中的內(nèi)毒素水平最高可為多少?
由于胎牛血清(FBS)中可能含有內(nèi)毒素,因此其可能會(huì)影響HEK-Blue?-4細(xì)胞的功能,進(jìn)而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此如果要使用胎牛血清(FBS),請(qǐng)務(wù)必保證無(wú)內(nèi)毒素。因此,我們建議在購(gòu)買(mǎi)胎牛血清(FBS)之前,請(qǐng)要求供應(yīng)商提供內(nèi)毒素水平的認(rèn)證報(bào)告。
拆封之后,HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2的穩(wěn)定性如何?
收到HEK-Blue??脂多糖(LPS)檢測(cè)試劑盒2之后,應(yīng)立即對(duì)其中的HEK-Blue?細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)繁殖,以凍存細(xì)胞。由于細(xì)胞可以保存在液氮中,因此細(xì)胞沒(méi)有有效期。至于試劑盒的其他部分,如果按照說(shuō)明書(shū)中的要求正確儲(chǔ)存于適當(dāng)條件下,可穩(wěn)定1年的時(shí)間。
在檢測(cè)血液樣本中的脂多糖(LPS)含量時(shí),如何避免NF-κB激活因子對(duì)NF-κB反應(yīng)的非特異性激活?
有兩種方法可以避免NF-κB激活因子對(duì)NF-κB反應(yīng)的非特異性激活:
使用HEK-Blue? Null1親本細(xì)胞系作為陰性對(duì)照。該細(xì)胞系只表達(dá)NFkB誘導(dǎo)系統(tǒng)(不表達(dá)負(fù)責(zé)LPS識(shí)別的TLR4受體),因此,HEK-Blue? Null1細(xì)胞可以檢測(cè)到任何非特異性的NFkB激活。
您可以使用Invivogen?Ultrapure LPS-RS拮抗TLR4反應(yīng)。如果使用該拮抗劑之后發(fā)現(xiàn)信號(hào)減弱,就可以確定樣本是TLR4特異性激活。該拮抗劑的參考文獻(xiàn)如下:LPS-RS ultrapure (#tlrl-prslps)。
??Primocin?
Primocin?含有四環(huán)素嗎?
不含,Primocin?不含四環(huán)素。
Primocin?用于預(yù)防支原體污染還是清除支原體污染?
PrimocinTM是一種預(yù)防性抗生素,對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌以及支原體和真菌均有效。PrimocinTM不能用于清除已經(jīng)污染的細(xì)胞中的微生物。
應(yīng)如何儲(chǔ)存?Primocin??
Primocin?在室溫運(yùn)輸。收到后可在4℃保存3個(gè)月,也可在-20℃長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年,期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。
??Normocin?
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)說(shuō),?Normocin?抗生素是必須要使用的嗎?
是的,Normocin?是常用的抗污染抗生素之一,Invivogen所有的細(xì)胞系都是用這種抗污染抗生素研發(fā)出來(lái)的,是實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞培養(yǎng)的常用抗生素。
Normocin?可以用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)嗎?
是的,Normocin?可以用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)。
應(yīng)如何儲(chǔ)存Normocin??
Normocin?在室溫運(yùn)輸。收到后可在4℃保存3個(gè)月,也可在-20℃長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。
產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年,期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。在4℃無(wú)菌條件下可穩(wěn)定3個(gè)月。
預(yù)防性抗生素Normocin?和Plasmocin?的區(qū)別是什么?
Normocin?預(yù)防性抗生素是對(duì)支原體、細(xì)菌、真菌均有生物活性,而Plasmocin?預(yù)防性抗生素只是特異性預(yù)防支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要一種廣譜性的抗污染抗生素,但是由于實(shí)驗(yàn)的特殊性,要求抗生素中不含酚紅。請(qǐng)問(wèn)Normocin?是否含有酚紅?如有有的話,是否還有其他可替代的符合我們實(shí)驗(yàn)要求的產(chǎn)品?
Normocin?抗生素中含有酚紅。如果如果您不能使用含有酚紅的添加劑,并且希望使用廣譜抗生素/抗真菌/抗支原體藥物,您可以使用PrimocinTM作為替代。
??NormocureTM
應(yīng)如何儲(chǔ)存NormocureTM?
NormocureTM在室溫運(yùn)輸。收到后可在4℃保存3個(gè)月,也可在-20℃長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。
產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年,期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。
Normocure?是否可以清除包括革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌在內(nèi)的所有細(xì)菌污染?
是的,Normocure?是一種針對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的高效廣譜抗污染抗生素。像環(huán)境中的葡萄球菌和無(wú)色桿菌對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基造成的污染均可有效被Normocure?清除。
PlasmocinTM?Treatment(支原體清除試劑)
當(dāng)溶解2瓶相同批次的支原體清除試劑時(shí),一瓶澄清透明,而另一瓶有沉淀,且37℃加熱或超聲處理后,沉淀并未溶解,請(qǐng)問(wèn)這是正常的嗎?為什么會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象?
沉淀物是凍融之后PlasmocinTM?Treatment中兩種抗生素之一。因?yàn)榭股卦谒峁舛认碌娜芙舛仁怯邢薜?,因此凍融?huì)使得抗生素在溶液中析出。出現(xiàn)這種情況之后不推薦使用超聲進(jìn)行處理,建議將其置于37℃下加熱30分鐘至1小時(shí),然后渦旋1-2分鐘,這會(huì)使沉淀物重懸溶解。PlasmocinTM?Treatment在37℃條件下可穩(wěn)定一周的時(shí)間,因此無(wú)需擔(dān)心37℃條件下加熱1小時(shí)會(huì)影響PlasmocinTM?Treatment的穩(wěn)定性及作用效果。另外,您也可以使用無(wú)菌水對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行1:1稀釋。
當(dāng)使用支原體清除試劑處理細(xì)胞時(shí),培養(yǎng)基中是否可以含有慶大霉素或抗真菌試劑?
Invivogen不推薦將PlasmocinTM?Treatment和其他抗生素,如慶大霉素及抗真菌試劑一起使用,因?yàn)檫@會(huì)影響它的活性。PlasmocinTM?Treatment在特定濃度下和對(duì)某些類型的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)出一定的毒性,因此將PlasmocinTM?Treatment和其他抗生素一起使用可能會(huì)使敏感的細(xì)胞系致死。
應(yīng)如何儲(chǔ)存支原體清除試劑?
PlasmocinTM?Treatment在室溫下運(yùn)輸。收到之后可在4℃穩(wěn)定1個(gè)月,或在-20℃條件下儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間,需注意避免重復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。
產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年,期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。
細(xì)胞已使用其他支原體去除試劑處理過(guò),但未成功去除支原體污染,現(xiàn)在如果繼續(xù)使用PlasmocinTM?Treatment支原體清除試劑可行嗎?
如果可以的話,強(qiáng)烈建議在未使用其他支原體清除試劑的新鮮細(xì)胞上使用PlasmocinTM?Treatment支原體清除試劑,以確保細(xì)胞不會(huì)對(duì)PlasmocinTM?Treatment支原體清除試劑中的任何一種抗生素產(chǎn)生耐藥性。
??Plasmocure?
應(yīng)如何儲(chǔ)存Plasmocure??
Plasmocure?支原體清除試劑在室溫下運(yùn)輸。收到之后可在4℃穩(wěn)定1個(gè)月,或在-20℃條件下儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間,需注意避免重復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。
產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年,期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。在100 mg/mL及無(wú)菌條件下,將其儲(chǔ)存于4℃可穩(wěn)定3個(gè)月的時(shí)間。
??Plasmocin? Prophylactic(支原體預(yù)防試劑)
?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑的CAS號(hào)是多少?
?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑沒(méi)有cas號(hào),因?yàn)樗遣煌股氐幕旌衔铩?/span>
?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑中是否存在鈣鹽?
?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑中不含鈣鹽。
應(yīng)如何儲(chǔ)存?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑?
?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑在室溫下運(yùn)輸,收到之后可在4℃下穩(wěn)定儲(chǔ)存一個(gè)月,要想穩(wěn)定儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間,請(qǐng)置于-20℃條件下儲(chǔ)存,請(qǐng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。
開(kāi)封后,可在-20℃條件下穩(wěn)定一年,期間需避免重復(fù)凍融循環(huán)。
??Fungin?
Fungin?含有兩性霉素B嗎?
Fungin?不含兩性霉素B,與兩性霉素B不同,Fungin?是一種高度穩(wěn)定的化合物,它不需要溶解在有毒的脫氧膽酸鹽中。
應(yīng)如何儲(chǔ)存Fungin???
Fungin??在室溫下運(yùn)輸,收到之后可在4℃下短期儲(chǔ)存,要想穩(wěn)定儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間,請(qǐng)置于-20℃條件下儲(chǔ)存,請(qǐng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。
具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。
開(kāi)封后,若在-20℃條件下,可穩(wěn)定一年,期間需避免重復(fù)凍融循環(huán)。若在10 mg/mL的濃度下置于4℃無(wú)菌條件下,可穩(wěn)定儲(chǔ)存3個(gè)月。
??PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒
PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒可以檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)菌污染嗎?
PlasmoTest?支原體檢測(cè)原理是基于TLR2的激活,因此它可以檢測(cè)支原體和細(xì)菌污染。但是,支原體污染不能用肉眼檢測(cè)到,而細(xì)菌污染中由于細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH下降,進(jìn)而導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁及顏色變化,因此可以結(jié)合肉眼觀察培養(yǎng)基是否出現(xiàn)異常來(lái)判斷培養(yǎng)基中是否存在支原體污染。
使用PlasmoTest?支原體試劑盒檢測(cè)之后,應(yīng)該在哪個(gè)波長(zhǎng)下讀取吸光值?
吸光值的讀取可以在620 nm-655 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)我們對(duì)于QUANTI-Blue溶液的分析,對(duì)于無(wú)法滿足620 nm-655 nm波長(zhǎng)的讀板儀,可以在600-680 nm波長(zhǎng)區(qū)間內(nèi)進(jìn)行吸光值的讀取。但是,這樣得到的結(jié)果可能會(huì)存在低飽和度及高背景的問(wèn)題。
當(dāng)使用PlasmoTest?支原體試劑盒檢測(cè)支原體污染時(shí),應(yīng)該使用多少細(xì)胞?
在收集上清液的同時(shí)收集細(xì)胞是很重要的,因?yàn)槿绻?xì)胞內(nèi)也存在支原體污染的話,可以同時(shí)檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)的支原體以及上清液中細(xì)胞外的支原體。
為什么使用PlasmoTest?支原體試劑盒檢測(cè)支原體污染時(shí),樣本需要加熱?
所有樣本必須加熱以去除上清液血清中可能存在的堿性磷酸酶,因?yàn)檫@可能會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。此外,加熱步驟可以消除樣本中殘留的支原體,以避免污染擴(kuò)散。
PlasmoTest?支原體試劑盒中提供的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照分別是什么?
由于信息是專有的,所以非常抱歉不能透露任何與對(duì)照品相關(guān)的信息。但是請(qǐng)放心,陽(yáng)性對(duì)照不是活的支原體。
當(dāng)使用PlasmoTest?支原體試劑盒時(shí)得到了假陽(yáng)性結(jié)果,是否是由于添加了二甲基亞砜(DMSO),?胎牛血清(FBS),?胰蛋白酶(Trypsin)或?PBS磷酸緩沖液影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果?
在研發(fā)PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒時(shí),我們已經(jīng)證明某些胰蛋白酶和血清會(huì)誘導(dǎo)TLR2反應(yīng)。高濃度DMSO(例如小于1/1000的稀釋)的使用會(huì)對(duì)HEK-Blue?細(xì)胞產(chǎn)生毒性,進(jìn)而導(dǎo)致背景值比較高。PBS緩沖液應(yīng)該不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議單獨(dú)測(cè)試培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照,以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。
當(dāng)使用PlasmoTest?試劑盒進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí),包括陰性對(duì)照在內(nèi)的所有孔均變?yōu)樗{(lán)色,該如何解釋呢?
有3種可能的原因會(huì)導(dǎo)致所有的孔變?yōu)樗{(lán)色:
1?這可能是由于培養(yǎng)基中存在堿性磷酸酶(AP)。為了驗(yàn)證是否存在這種情況,可以進(jìn)行一個(gè)非常簡(jiǎn)單的測(cè)試。只需在200μL的重懸HEK-Blue?檢測(cè)試劑中添加50μL用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基(無(wú)細(xì)胞)。如果培養(yǎng)基變藍(lán),則是由于培養(yǎng)基血清中存在堿性磷酸酶(AP)。此時(shí)需加熱培養(yǎng)基以去除堿性磷酸酶(AP)并重新進(jìn)行相同的測(cè)試。放置相同的“測(cè)試”樣本應(yīng)得到陰性結(jié)果。
2?如果將培養(yǎng)基加入到HEK-Blue?檢測(cè)試劑中無(wú)反應(yīng),則可能是由于HEK-Blue? -2細(xì)胞受到污染導(dǎo)致所有的孔變?yōu)樗{(lán)色,此時(shí)最佳的選擇是換用新的細(xì)胞。請(qǐng)注意,在此過(guò)程中最好使用濾嘴避免細(xì)胞污染。
3?還有可能是在測(cè)試之前對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng)導(dǎo)致所有孔變?yōu)樗{(lán)色。Invivogen提供以下建議以降低背景信號(hào)值,避免在刺激細(xì)胞之前NF-κB的激活,從而避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果:
● 使用預(yù)熱的PBS清洗細(xì)胞
●?使用熱滅活的胎牛血清(FBS),有些胎牛血清(FBS)雖然無(wú)菌,但含有可能激活HEK-Blue?-2細(xì)胞的微生物碎片
●?在刺激細(xì)胞之前請(qǐng)勿離心
●?請(qǐng)勿使用胰蛋白酶
PlasmoTest?試劑盒中陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的OD值在什么范圍內(nèi)是正常的?
陽(yáng)性對(duì)照的OD630nm在0.9-1.2范圍內(nèi)是正常的,陰性對(duì)照的OD630nm需小于0.2.
不小心將要測(cè)試的上清液在室溫下放置了2天,這會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果嗎?
如果樣本本身無(wú)菌且置于無(wú)菌的室溫條件下是不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的。但是如果不能立即檢測(cè)收集好的上清液,建議您置于-20℃冷凍儲(chǔ)存。
當(dāng)?HEK Blue?-2細(xì)胞開(kāi)始生長(zhǎng)匯合之后,推薦使用什么分流比進(jìn)行分流。
分流比取決于細(xì)胞什么時(shí)候需要匯合。一般HEK-Blue??細(xì)胞的增值時(shí)間大概是24小時(shí)。因此,如果分流比為1:2時(shí),細(xì)胞應(yīng)該在第二天匯合。如果分流比為1:4,則細(xì)胞應(yīng)該在兩天后匯合。
在陽(yáng)性對(duì)照及陰性對(duì)照試劑瓶中能夠看到粉末狀的試劑嗎?
陽(yáng)性對(duì)照是一種透明的脂質(zhì)膜,通常很難用肉眼觀察。而陰性對(duì)照是一種可見(jiàn)的粉末。
PlasmoTest?試劑盒可以檢測(cè)血清、血漿樣本嗎?如果可以的話,哪種樣本的檢測(cè)結(jié)果會(huì)更好一些?
Invivogen只在PlasmoTestTM試劑盒中的HEK-BlueTM-2細(xì)胞上測(cè)試過(guò)幾次血漿和血清樣本。結(jié)果表明,與使用標(biāo)準(zhǔn)樣品(在DMEM中)相比,血清樣品的敏感性只有一個(gè)對(duì)數(shù)差異。例如,在血清中,我們可以加檢測(cè)到高達(dá)10^4的UFC/ml發(fā)酵支原體,而在DMEM中,我們可以檢測(cè)到10^3的UFC/ml發(fā)酵支原體。另一方面,我們發(fā)現(xiàn)DMEM和血漿樣本之間存在3個(gè)對(duì)數(shù)差異。例如,在血漿中,支原體濃度高達(dá)10^6 UFC/ml才可被檢測(cè)到,而在DMEM中,10^3 UFC/ml的支原體便可被檢測(cè)到。因此,PlasmoTestTM試劑盒對(duì)血清樣本的敏感性要高于血漿樣本,更建議使用血清樣本而非血漿樣本。
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