? 基因篩選抗生素常見問題

多種篩選抗生素可以用于同一細胞系嗎？

可以的，所有的篩選抗生素均可同時或任意組合使用。

為什么在初始細胞培養(yǎng)的過程中不推薦使用篩選抗生素？

我們建議在細胞傳代兩次之前不要添加篩選抗生素，因為細胞在初始培養(yǎng)過程中是脆弱的，抗生素可能會降低細胞活力。并且耐藥標記的充分表達使細胞獲得對這些篩選抗生素的耐藥性是非常重要的。

如何停用Invivogen的篩選抗生素？

對于停用Invivogen所有的篩選抗生素（Zeocin?, Hygromycin, G418, Phleomycin, Puromycin, and Blasticidin），建議如下：

●?在培養(yǎng)基中加入5%的NaOH（氫氧化鈉）和0.1%的NaClO（次氯酸鈉）。

●?在室溫放置5-10分鐘。

該操作能有效地使培養(yǎng)基中的所有抗生素失效。

可以提供Invivogen篩選抗生素在細胞培養(yǎng)基中的半衰期數(shù)據(jù)嗎？

非常抱歉，Invivogen沒有關于篩選抗生素在細胞培養(yǎng)中的半衰期數(shù)據(jù)。Invivogen在測試時是在新鮮培養(yǎng)，而非儲備培養(yǎng)基中添加篩選抗生素的。但是如果有需要的話，可以在培養(yǎng)基中補充篩選抗生素，并儲存于4℃，儲存時間不超過一周。

應該如何儲存Invivogen的篩選抗生素？

Invivogen所有的篩選抗生素均在室溫下運輸，收到之后，可置于4℃短期儲存，若要長期儲存需置于-20℃。避免重復凍融循環(huán)。有效期在產品標簽上。

開封之后，在-20℃下可穩(wěn)定一年時間，但需避免凍融循環(huán)。在4℃無菌條件下可穩(wěn)定3個月的時間。

Invivogen各類篩選抗生素的特性。

??Hygromycin B Gold（潮霉素B）

技術資料中只有Hygromycin B Gold（潮霉素B）在低鹽LB培養(yǎng)基中推薦的使用濃度為50-100 ug/ml,但是實驗室中只有高鹽的LB培培養(yǎng)基，那應該使用多少濃度的Hygromycin B Gold（潮霉素B）呢？

Invivogen推薦在高鹽LB的培養(yǎng)基中使用100 – 150 μg/mL的Hygromycin B Gold（潮霉素B）。

將Hygromycin B Gold（潮霉素B）用于哺乳動物細胞時，應使用什么濃度？

將Hygromycin B Gold（潮霉素B）用于哺乳動物細胞時推薦的使用濃度為50-200 ug/ml，也有少數(shù)參考文獻中提到的使用濃度高達500 ug/ml。建議在正式實驗開始前，先確定可殺死宿主細胞系所需要的Hygromycin B Gold（潮霉素B）的最佳濃度。Hygromycin B Gold（潮霉素B）的常用劑量為200 ug/ml，即將原液稀釋500倍。關于更多的細節(jié)信息，請參考該產品的說明書。

將Hygromycin B Gold（潮霉素B）用于大腸桿菌時，應使用什么濃度？

在低鹽LB培養(yǎng)基中推薦使用50-100 ug/ml的Hygromycin B Gold（潮霉素B）篩選耐潮霉素轉化菌株。含有Hygromycin B Gold（潮霉素B）的平板培養(yǎng)基可在4℃下穩(wěn)定1個月。

??Zeocin?（博萊霉素）

Invivogen提供的Zeocin?（博萊霉素）是硫酸的還是鹽酸的？

Invivogen提供的是硫酸Zeocin?（博萊霉素）。

Zeocin?（博萊霉素）是光敏的嗎？

不是的，Zeocin?（博萊霉素）不是光敏的。

Zeocin?（博萊霉素）對pH敏感嗎？

是的，Zeocin?（博萊霉素）對pHshiite敏感的，其在低pH值和高pH值(<6和>8)或弱氧化劑存在下會發(fā)生不可逆變性。

將Zeocin?（博萊霉素）稀釋至工作濃度，推薦使用什么緩沖液？

將Zeocin?（博萊霉素）稀釋至工作濃度時推薦使用無菌水。

推薦使用什么濃度的HEPES緩沖液去重懸Zeocin?（博萊霉素）？

用于重懸Zeocin?（博萊霉素）的HEPES緩沖液濃度為5 g/L.

Zeocin?（博萊霉素）應如何儲存？

Zeocin?（博萊霉素）在室溫條件下運輸，收到之后，可置于4℃短期儲存，若要長期儲存請置于-20℃。

避免重復凍融循環(huán)，有效期在產品標簽上。

對于粉末狀的Zeocin?（博萊霉素），一旦重懸至100 mg/mL，可在4℃條件下儲存12個月，在-20℃條件下儲存18個月。

對于溶液狀的Zeocin?（博萊霉素），開封后，可在-20℃下可穩(wěn)定一年時間，但需避免凍融循環(huán)。在4℃下可穩(wěn)定3個月的時間，但需置于無菌條件。

將Zeocin?（博萊霉素）用于哺乳動物細胞時，應使用什么濃度？

將Zeocin?（博萊霉素）用于哺乳動物細胞系時推薦的使用濃度為50-400 ug/ml，也有少數(shù)參考文獻中提到的使用濃度低至20 ug/mL，或高至1000 ug/mL。建議在正式實驗開始前，先確定可殺死宿主細胞系所需要的Zeocin?（博萊霉素）的最佳濃度。關于更多的細節(jié)信息，請參考該產品的說明書。

將Zeocin?（博萊霉素）用于大腸桿菌時，應使用什么濃度？

在低鹽LB培養(yǎng)基中推薦使用25 ug/mL的Zeocin?（博萊霉素）篩選耐博萊霉素轉化菌株。

注意：不要使用含Tn5轉座因子的大腸桿菌菌株，如MC1066。因為Tn5編碼博萊霉素抗性基因，是大腸桿菌菌株對Zeocin?（博萊霉素）產生抗性。

??Phleomycin（腐草霉素）

Phleomycin（腐草霉素）應如何儲存？

Phleomycin（腐草霉素）室溫條件下運輸，收到之后，可置于4℃短期儲存，若要長期儲存請置于-20℃。

避免重復凍融循環(huán)，有效期在產品標簽上。

對于粉末狀的Phleomycin（腐草霉素），一旦重懸至20 mg/mL，可在4℃條件下儲存12個月，在-20℃條件下儲存18個月。

對于溶液狀的Phleomycin（腐草霉素），開封后，可在-20℃下可穩(wěn)定一年時間，但需避免凍融循環(huán)。在4℃下可穩(wěn)定3個月的時間，但需置于無菌條件。

將Phleomycin（腐草霉素）用于哺乳動物細胞時，應使用什么濃度？

將Phleomycin（腐草霉素）用于哺乳動物細胞系時推薦的使用濃度為5-50 ug/ml。建議在正式實驗開始前，先確定可殺死宿主細胞系所需要的Phleomycin（腐草霉素）的最佳濃度。關于更多的細節(jié)信息，請參考該產品的說明書。

將Phleomycin（腐草霉素）用于大腸桿菌時，應使用什么濃度？

在低鹽LB培養(yǎng)基中推薦使用5 ug/mL的Phleomycin（腐草霉素）篩選耐腐草霉素轉化菌株。

注意：一般大腸桿菌受體菌株（如HB101、DH5α、MC1061）與攜帶博萊霉素耐藥基因（如Sh ble、 Tn5）的載體轉化可對Phleomycin（腐草霉素）產生抗性。

??G418（遺傳霉素）

同時購買的兩瓶G418遺傳霉素均置于-20℃儲存，為什么其中一瓶會凝結成固體，而另外一瓶則是完全透明的液體？

Invivogen實驗室也有注意到同樣的現(xiàn)象。由于液體的結冰反應需要擾動才可以進行，所以即使在0℃以下，溶液的結冰反應也不可自發(fā)進行。這種擾動可以是震動、沖擊等。因此不同管G418凝固的差異可以解釋為對其中一管的G418有一個小的沖擊或震動，而未碰觸到其他管。

注意，液體中的凝固反應是一個連鎖反應，一旦發(fā)生便可迅速擴散到整個可用的溶液。

應如何讓儲存G418?

G418在室溫下運輸。收到之后，請置于4℃短期儲存，若要長期儲存請置于-20℃。避免重復凍融循環(huán)，有效期在產品標簽上。

一旦拆封，-20℃條件下儲存可穩(wěn)定一年，期間需避免重復凍融循環(huán)。4℃無菌條件下儲存可穩(wěn)定3個月。

將G418用于哺乳動物細胞時，應使用什么濃度？

G418用于篩選和維護轉染neo基因的哺乳動物細胞系的工作濃度取決于多種因素，例如細胞類型。因此，我們建議正式實驗開始之前使用不同濃度的抗生素（例如100 ug/mL- 1 mg/mL）處理細胞，以確定殺死宿主細胞系所需的最佳抗生素濃度。請注意：G418常用劑量為400 ug/mL。

是否可以使用G418在大腸桿菌中篩選含有Neo基因的質粒？

不可以的。G418只能在表達Neo基因的哺乳動物細胞中使用。對篩選表達Neo基因的大腸桿菌轉化子建議使用 Kanamycin（卡那霉素）。

??Puromycin（嘌呤霉素）

應使用什么緩沖液重懸Puromycin（嘌呤霉素）？

Invivogen推薦使用HEPES緩沖液 （5 mM, pH 7.3）重懸Puromycin（嘌呤霉素）。

將Puromycin（嘌呤霉素）置于-20℃儲存時出現(xiàn)結晶固體，是否正常？

是正常的，在儲存過程中可能會形成Puromycin（嘌呤霉素）的結晶沉淀。如果發(fā)生此情況，請將產品置于37℃下加熱30分鐘，直到結晶沉淀消失。結晶沉淀的形成并不影響產品的活性。

應如何儲存Puromycin（嘌呤霉素）?

Puromycin（嘌呤霉素）在室溫下運輸。收到之后，可置于4℃短期儲存，若要長期儲存請置于-20℃。避免重復凍融循環(huán)，有效期在產品標簽上。

一旦拆封，-20℃條件下儲存可穩(wěn)定一年，期間需避免重復凍融循環(huán)。4℃無菌條件下儲存可穩(wěn)定3個月。

將Puromycin（嘌呤霉素）用于哺乳動物細胞時，應使用什么濃度？

Puromycin（嘌呤霉素）用于篩選哺乳動物細胞系的工作濃度為1-10 ug/mL。我們建議正式實驗開始之前使用不同濃度的抗生素處理細胞，以確定殺死宿主細胞系所需的最佳抗生素濃度。請注意：Puromycin（嘌呤霉素）能迅速殺死不含pac基因的真核細胞。更多的細節(jié)信息，請參考本產品說明書。

將Puromycin（嘌呤霉素）用于大腸桿菌時，應使用什么濃度？

Puromycin（嘌呤霉素）對大腸桿菌具有很低的活性，但是當?shù)望}LB培養(yǎng)基的pH在7.5-8之間時，可使用100-125 ug/mL的Puromycin（嘌呤霉素）篩選耐嘌呤霉素轉化菌株。

??Blasticidin（殺稻瘟菌素）

應如何儲存Blasticidin（殺稻瘟菌素）？

Blasticidin（殺稻瘟菌素）在室溫下運輸。收到之后，可置于4℃短期儲存，若要長期儲存請置于-20℃。避免重復凍融循環(huán)，有效期在產品標簽上。

一旦拆封，-20℃條件下儲存可穩(wěn)定一年，期間需避免重復凍融循環(huán)。4℃無菌條件下儲存可穩(wěn)定3個月。

注意：對于粉末狀的Blasticidin（殺稻瘟菌素），若重懸之后儲存，其濃度必須大于或等于10 mg/mL才可在-20℃的條件下穩(wěn)定1年，需注意避免重復凍融循環(huán)。如果儲存時濃度低于10 mg/mL,則無法保證該產品的穩(wěn)定性。

將Blasticidin（殺稻瘟菌素）用于哺乳動物細胞時，應使用什么濃度？

Blasticidin（殺稻瘟菌素）用于篩選哺乳動物細胞系的工作濃度為1-10 ug/mL，也有少數(shù)參考文獻中的使用濃度高達30 ug/mL。我們建議正式實驗開始之前使用不同濃度的抗生素處理細胞，以確定殺死宿主細胞系所需的最佳抗生素濃度。更多的細節(jié)信息，請參考本產品說明書。

將Blasticidin（殺稻瘟菌素）用于大腸桿菌時，應使用什么濃度？

Blasticidin（殺稻瘟菌素）對大腸桿菌具有很低的活性，但是當?shù)望}LB培養(yǎng)基的pH為8時，可使用100 ug/mL的Blasticidin（殺稻瘟菌素）篩選耐殺稻瘟菌素轉化菌株。注意：高pH值可提高殺稻瘟菌素的活性。

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