本篇給各位需要做科研實(shí)驗(yàn)的朋友們準(zhǔn)備了在使用peprotech生產(chǎn)的ELISA產(chǎn)品時(shí)，會遇到的一些常見問題，及解答，希望能夠幫助到各位做科研的朋友們。
1. PeproTech ELISA試劑盒中所含的HRP(辣根過氧化物酶)偶聯(lián)物試劑的穩(wěn)定性如何？
ABTS ELISA試劑盒中的Avidin-HRP在2-8?C最多保存一個月，在-20?C最長可保存2年，此時(shí)建議分裝凍存，以避免反復(fù)凍融。TMB ELISA試劑盒中的Streptavidin-HRP在2-8?C中可保存半年以上。
2. 我如何知道某個試劑盒的交叉反應(yīng)信息？
PeproTech在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自行測試了其ELISA試劑盒的交叉反應(yīng)性，您可在試劑盒的說明書中查看測試結(jié)果。
3. ELISA實(shí)驗(yàn)過程中如果想周末停一下怎么辦？
可以在星期五用包被抗體將板包好，然后放在4?C保存，下周一再繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。請注意：抗體包被時(shí)間的改變可能會引起板間結(jié)果的差異。
4. PeproTech的EDK是否適用于所有類型的標(biāo)本？
雖然PeproTech沒有用其試劑盒對每種標(biāo)本進(jìn)行測試，但這些試劑盒應(yīng)該適用于(但不僅限于)以下標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液和唾液。
5. 顯色反應(yīng)需要終止嗎？
Avidin-HRP和底物ABTS的顯色反應(yīng)是不需要終止的。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品的零孔OD值小于0.2，或最高濃度孔OD值小于1.2時(shí)，通?？梢垣@得可靠的標(biāo)準(zhǔn)曲線。如要終止顯色反應(yīng)，可以用1% SDS (十二烷基磺酸鈉)作為終止液。雖然資料顯示SDS是ABTS的最適終止液，但PeproTech并未在實(shí)驗(yàn)室中使用終止液。
對于PeproTech所有的TMB試劑盒，推薦使用終止液(1M HCl)。
6. 對于TMB EDK試劑盒，除620nm的校正波長以外, 還可用哪些波長進(jìn)行校正？
TMB試劑盒可以用540，570，620或650nm等校正波長。
7. PeproTech的ABTS EDK可以用TMB作為底物嗎？
PeproTech的ABTS EDK是用ABTS進(jìn)行優(yōu)化的，因此最好使用ABTS作為底物。這些試劑盒也可與TMB配合使用，但需要做一些調(diào)整：
?試劑盒中的Avidin-HRP不能與TMB配伍，必須另購鏈霉親合素-HRP。
?鏈霉親合素-HRP的工作濃度需要優(yōu)化。
?使用鏈霉親合素-HRP和TMB時(shí)，通常需用終止液，請按照TMB的廠家說明書操作。
?加終止液前，TMB的反應(yīng)時(shí)間需要優(yōu)化。
?請使用推薦的酶標(biāo)板，并在450nm讀取吸光值，校正波長為650nm。
8. EDK的組分中為什么要添加D-甘露醇？
在EDK的組分中加入D-甘露醇的目的是使蛋白/抗體可見，這不會影響ELISA的檢測結(jié)果。
9. 是否可以將EDK說明書中的曲線作為我的標(biāo)準(zhǔn)曲線？
每塊ELISA板必須單獨(dú)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，也就是說，一塊板的標(biāo)準(zhǔn)曲線不能用于另一塊板。PeproTech的EDK說明書中提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線是在自己的實(shí)驗(yàn)室中做出來的，僅可用作示例。?
10. PeproTech的標(biāo)準(zhǔn)曲線是怎樣生成的？
PeproTech在實(shí)驗(yàn)室中用Molecular Devices?公司的酶標(biāo)儀讀板，然后用SOFTmax? PRO軟件進(jìn)行結(jié)果分析，該軟件能將獲取的數(shù)據(jù)進(jìn)行四參數(shù)曲線擬合，公式如下：
四參數(shù)曲線擬合(4-P Fit)：
?
x：濃度(pg/ml)
y：OD值(450nm – 650nm)
A, B, C, D對應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)曲線的四個參數(shù)*。
*想了解參數(shù)的詳細(xì)信息，請與我們的質(zhì)量保證(QA)部門聯(lián)系。?
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