ChromaLink Biotin Maleimide將紫外線可追蹤的生物素結(jié)合到含硫醇的蛋白質(zhì)、肽和/或抗體上。ChromaLink Biotin Maleimide已經(jīng)被設(shè)計成包括許多新的特征的標(biāo)記試劑。如圖1所示,分子結(jié)構(gòu)包含一個雙芳基腙發(fā)色團(a),由PEG3連接臂(b)連接到生物素(c)。這種試劑允許結(jié)合生物素的直接光譜定量。延伸的PEG3接頭保持生物素/鏈霉親和素的親和力,并在修飾后保持蛋白質(zhì)的溶解性,而馬來酰亞胺官能團(d)有效地修飾水性緩沖液中的硫醇。
圖1. ChromaLink Biotin Maleimide的結(jié)構(gòu)
用ChromaLink??Biotin標(biāo)記蛋白質(zhì)消除了通常用于定量生物素?fù)饺氲姆爆嵸M時的HABA測定的需要。相反,生物素的摻入通過簡單的分光光度測量在兩個波長下定量(A280 / A354)。典型的標(biāo)記結(jié)果在圖2中通過四個樣品的光譜重疊掃描來說明。如圖所示,牛IgG (100微升@?1mg/ml)用ChromaLink??Biotin標(biāo)記為0、5、10和15mol。光譜分析說明了生物素?fù)饺氲目梢暬投渴嵌嗝慈菀住?/p>
圖2.?用ChromaLink??Biotin標(biāo)記的牛IgG重疊光譜。使用了各種生物素-蛋白質(zhì)摩爾質(zhì)量(5X,10X和15X)。注意354nm處的紫外信號表明生物素的摻入。所有光譜都在分子動力學(xué)光譜儀上掃描(220-420nm)。
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