產(chǎn)品介紹：

NATE?是InvivoGen設(shè)計(jì)的一種核酸轉(zhuǎn)染增強(qiáng)劑，可以提高難轉(zhuǎn)染細(xì)胞的瞬轉(zhuǎn)與穩(wěn)轉(zhuǎn)效率，尤其適合人的單核細(xì)胞與小鼠巨噬細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如外周血單核細(xì)胞（THP-1）和小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞（RAW 264.7），且只需在平時(shí)加轉(zhuǎn)染試劑操作前30min加入NATE?即可。值得注意的是，NATE對細(xì)胞溫和，不會(huì)對細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生任何進(jìn)一步的毒性。

在真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中，外源性核酸(如質(zhì)粒)的主要障礙是會(huì)被胞質(zhì)傳感器檢測，如cGAS/STING、AIM2炎性小體和LC3介導(dǎo)的自噬。這些防御信號級聯(lián)的激活常常會(huì)降低轉(zhuǎn)染率和細(xì)胞存活率，特別是在難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(如免疫細(xì)胞)中會(huì)更明顯。當(dāng)使用NATE?時(shí)，這些核酸傳感通路將被抑制，從而在轉(zhuǎn)染過程中保護(hù)質(zhì)粒并促進(jìn)其表達(dá)。

產(chǎn)品特色：

與常用轉(zhuǎn)染試劑?(e.g. GeneXPlus, Lipofectamine? LTX, and jetPRIME?) 及物理方法兼容。

更高的轉(zhuǎn)染率，也適用于大質(zhì)粒?(> 10kb)。

在所有的轉(zhuǎn)染測試方案中都顯示對細(xì)胞溫和，沒有毒性。

產(chǎn)品信息：

應(yīng)用舉例

利用GeneXPlus將GFP標(biāo)記的質(zhì)粒(3kb)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到THP-1細(xì)胞中，48小時(shí)后，熒光顯微鏡下觀察，使用NATE?后轉(zhuǎn)染效率明顯增加。

利用GeneXPlus、Lipofectamine LTX、jetPRIME、nucleofection等常用轉(zhuǎn)染方法，將~3kb質(zhì)粒(左)和~8kb質(zhì)粒(右)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至THP-1細(xì)胞。48小時(shí)后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染效率，與不使用NATE?轉(zhuǎn)染相比，數(shù)據(jù)有明顯差異變化。

詳細(xì)說明

在真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中，“外來”核酸(如質(zhì)粒DNA)的主要障礙是它們自身被胞質(zhì)核酸傳感器檢測到，如黑色素瘤缺乏因子2 (AIM2)和環(huán)GMP-AMP合成酶(cGAS)介導(dǎo)的自噬。

AIM2是一種細(xì)胞質(zhì)傳感器，與雙鏈DNA (dsDNA)結(jié)合后，會(huì)形成一種稱為炎性小體的蛋白質(zhì)復(fù)合物。最終，促炎癥細(xì)胞因子IL-1β和IL-18的成熟需要通過相應(yīng)的AIM2 炎癥小體的形成和半胱天冬氨酸蛋白水解酶1（caspase-1）的活化來完成。這些細(xì)胞因子的產(chǎn)生不利于轉(zhuǎn)染成功。

cGAS能識別dsDNA，并通過STING/TBK1/IRF3信號軸誘導(dǎo)I型干擾素(IFNs)的產(chǎn)生，以及一些干擾素刺激基因(ISGs)的表達(dá)，這些強(qiáng)大的效應(yīng)功能，在轉(zhuǎn)染中是非常多余的。

此外，STING的激活不依賴于TBK1-和INF，就可以導(dǎo)致LC3相關(guān)的自噬。最終，自噬體將形成包含“外來”核酸(如質(zhì)粒)的形式，并與溶酶體融合在細(xì)胞中降解。

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