◆?人IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot?PLUS和IFN-γ?SARS-CoV-2 ELISpot PLUS試劑盒

IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot?PLUS試劑盒可用于對SARS-CoV-2多肽應(yīng)答中能夠分泌干擾素γ（IFN-γ）、白介素2（IL-2）細胞因子或同時分泌這兩種細胞因子（FluoroSpot）的細胞進行定量，IFN-γ?SARS-CoV-2 ELISpot PLUS試劑盒（ALP）僅可對能夠分泌干擾素γ（IFN-γ）的細胞進行計數(shù)。FluoroSpot分析方法是對ELISpot分析方法的一種創(chuàng)新性發(fā)展，其最大的優(yōu)勢是可以同時檢測多個指標。FluoroSpot使用熒光法進行檢測，在結(jié)果讀取時Mabtech推薦使用配有過濾器的自動FluoroSpot讀板儀，使用激發(fā)波490 nm/發(fā)射波510 nm（FITC）檢測490試劑，使用激發(fā)波550 nm/發(fā)射波570 nm（Cy3）檢測550試劑，同時過濾器應(yīng)該具有高度的特異性，以避免滲色偽像。分泌兩種細胞因子的細胞由計算機處理的覆蓋圖模式識別。

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??試劑盒組分

人IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot?PLUS試劑盒

● 預(yù)包被有單克隆捕獲抗體的低熒光板

●?SARS-CoV-2 S2 N定義肽庫、SARS-CoV-2 S1蛋白掃描肽庫

●?單克隆檢測抗體

●?共軛于熒光基團的輔助試劑

●?熒光增強劑

●?用于共刺激的CD28單克隆抗體

人IFN-γ?SARS-CoV-2 ELISpot PLUS試劑盒（ALP）

●?預(yù)包被單克隆抗體的ELISpot可拆板

●?SARS-CoV-2 S2 N定義肽庫、SARS-CoV-2 S1蛋白掃描肽庫

●?生物素化的檢測抗體

●?鏈霉親和素- ALP

●?即用型TMB底物

另外，Mabtech還提供了人T細胞的多克隆抗體（mAb CD3-2）作為細胞因子分泌的陽性對照。

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??產(chǎn)品特色

●?方便快速

●?靈敏度高

●?穩(wěn)定性好

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??應(yīng)用實例

使用IFN-γ/IL-2 FluoroSpot和IFN-γ?ELISpot對SARS-CoV-2 S1 S2 N定義肽庫進行驗證。SARS-CoV-2 S1 S2 N定義肽庫包含41條來自人類SARS-CoV-2病毒刺突蛋白（spike protein，S）和核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein，N）的多肽，可對能夠特異性識別刺突蛋白（Spike protein, S）和核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein, N）的淋巴細胞進行定量。

用Mabtech's SARS-CoV-2 S1 S2 N?肽庫對來自3例先前經(jīng)PCR證實為SARS-CoV-2陽性患者的外周血單核細胞（PBMC）及未感染COVID-19健康人體內(nèi)的外周血單核細胞（PBMC）進行刺激（每孔250,000?個細胞），植物血凝素（PHA）刺激的細胞作為陽性對照（每孔50000個細胞），未刺激的細胞作為陰性對照（每孔250,000?個細胞）。Mabtech IRIS通過使用IFN-γ/IL-2 FluoroSpot?對T細胞應(yīng)激反應(yīng)進行分析。

人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot結(jié)果。使用CD8Fab-TACS?分離試劑盒（IBA Lifesciences）對全血中CD8+細胞進行分離，將分離出的細胞加入預(yù)先包被好人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot板中（每孔300,000個細胞），孵育過夜。左圖無Mabtech肽庫，右圖有Mabtech肽庫。

使用IFN-γ?ELISpot對SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S1亞基掃描肽庫進行驗證。SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S1亞基掃描肽庫是對之前SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S2亞基及核衣殼蛋白（N）肽庫的補充，其包含166個來自人類SARS-CoV-2病毒的多肽，這些多肽由15個聚體和11個氨基酸重疊而成，覆蓋刺突蛋白（S）的S1結(jié)構(gòu)域（氨基酸13-685）。肽庫以凍干粉的形式提供，分為兩瓶，每瓶各含有83個多肽。合成肽的平均純度為80%。

人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot結(jié)果。取先前經(jīng)PCR證實為SARS-CoV-2陽性患者的外周血單核細胞（PBMC），加入預(yù)先包被好人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot板中（每孔300,000個細胞），孵育過夜，使用ELISpot對分泌IFN-γ?的細胞進行計數(shù)。左圖無SARS-CoV-2 S1?掃描肽庫和CD28抗體，右圖有SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S1亞基掃描肽庫和CD28抗體。

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◆?人IgG SARS-CoV-2受體結(jié)合區(qū)域（RBD）ELISpot?PLUS?(HRP)試劑盒

人在感染SARS-CoV-2后，機體內(nèi)的先天性免疫系統(tǒng)會產(chǎn)生特異性識別新冠病毒表面蛋白的抗體，如刺突蛋白（S）、核衣殼蛋白（N）、膜蛋白（M）等。新冠病毒與人體的作用位點是其表面刺突蛋白（S）的受體結(jié)合區(qū)域（RBD）與人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）受體，因此特異性識別SARS-CoV-2?受體結(jié)合區(qū)域（RBD）的抗體可有效阻止病毒與人體結(jié)合。Mabtech的人IgG SARS-CoV-2?受體結(jié)合區(qū)域（RBD）ELISpot?PLUS?（HRP）試劑盒可對能夠分泌SARS-CoV-2?受體結(jié)合區(qū)域（RBD）特異性IgG抗體的B細胞及分泌IgG（總IgG）的所有細胞進行定量，檢測原理如下。

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??試劑盒組分

●?預(yù)包被抗人IgG單克隆抗體

●?帶有免疫缺陷伴血小板減少綜合征（WASP）標記的重組受體結(jié)合區(qū)域（RBD）蛋白

●?生物素化檢測單抗

●?HRP標記的抗免疫缺陷伴血小板減少綜合征蛋白（WASP）抗體

●?HRP標記的鏈霉親和素

●?多克隆激活劑

●?即用型TMB底物

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??產(chǎn)品特色

●?方便快捷

●?靈敏度高

●?穩(wěn)定性好

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??應(yīng)用實例

使用ELISpot對可分泌受體結(jié)合區(qū)域（RBD）特異性抗體IgG的細胞進行定量。在離心管中分別培養(yǎng)來自COVID-19康復(fù)期及健康人體內(nèi)的外周血單核細胞（PBMC）3天。徹底清洗細胞并加入預(yù)包被抗人IgG單克隆抗體的ELISpot孔板（200,000個細胞/孔）中，用帶有WASP標簽的重組受體結(jié)合區(qū)域（RBD）抗體和HRP標記的抗WASP抗體檢測RBD特異性斑點。左圖有R848+IL-2（用于刺激記憶B細胞），右圖無R848+IL-2。

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