?FuGENE??4K——四步輕松搞定轉(zhuǎn)染
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染，是將外源基因?qū)胝婧思?xì)胞，是用來(lái)研究基因表達(dá)調(diào)控的有效手段。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類：一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（永久轉(zhuǎn)染）。目前，常用的目的基因?qū)敕椒ㄓ辛姿徕}沉淀法、電穿孔法、病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及顯微注射法等。理想細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染效率高、細(xì)胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。
幾種常見(jiàn)的轉(zhuǎn)染方法對(duì)比：
轉(zhuǎn)染方法 | 原理 | 特點(diǎn) | 應(yīng)用 |
磷酸鈣法 | 磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞。 | 不適用于原代細(xì)胞，操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差，有些細(xì)胞不適用。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入。 | 適用性廣，但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)，所有細(xì)胞 |
病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染 | 通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中 | 有安全風(fēng)險(xiǎn)；限定宿主細(xì)胞。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，特定宿主細(xì)胞 |
陽(yáng)離子脂質(zhì)體法 | 帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞。 | 適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好，但轉(zhuǎn)染時(shí)需除去血清。轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)，所有細(xì)胞 |
陽(yáng)離子聚合物法 | 帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。 | 除了具有陽(yáng)離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡(jiǎn)單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點(diǎn)外，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細(xì)胞毒性低等特點(diǎn)，是新一代的轉(zhuǎn)染試劑。 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)，所有細(xì)胞 |
顯微注射法 | 用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核。 | 轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞 | 穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) |
FuGENE??4K是FuGENE最新研發(fā)的最有效的廣譜DNA轉(zhuǎn)染試劑，它轉(zhuǎn)染效率高、毒性低、可重復(fù)性好，無(wú)論是原代細(xì)胞、干細(xì)胞等難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系，還是293和CHO等懸浮細(xì)胞，FuGENE?4K都展現(xiàn)出非凡的轉(zhuǎn)染性能。FuGENE??4K是FuGENE??HD試劑的升級(jí)版，產(chǎn)品性能優(yōu)于Lipofectamine?3000。僅需1瓶試劑，4步就可輕松搞定轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，無(wú)需添加額外試劑，轉(zhuǎn)染步驟簡(jiǎn)單快速！
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STEP 1?轉(zhuǎn)染當(dāng)天培養(yǎng)細(xì)胞至70%-90%的融合度
STEP 2 準(zhǔn)備DNA質(zhì)粒
將2μg質(zhì)粒DNA（0.2-1μg/μl）添加到預(yù)熱的培養(yǎng)基中并渦旋。
STEP 3?加入FuGENE?4K
按FuGENE?4K轉(zhuǎn)染試劑：DNA=3:1的比例，將6μl FuGENE?4K試劑直接加入培養(yǎng)基中，立即混合。其他比例，請(qǐng)參考產(chǎn)品說(shuō)明書。將FuGENE?4K/DNA混合物在室溫下孵育5-15min。
STEP 4?轉(zhuǎn)染及分析
將FuGENE?4K /DNA混合物加入細(xì)胞中，培養(yǎng)24-48小時(shí)。分析轉(zhuǎn)染效率。
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產(chǎn)品信息
名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
FuGENE??4K DNA?Transfection Reagent | 4K-1000 | 1mL |
4K-5000 | 5mL (5 x 1ml) |
4K-10000 | 10mL |
4K-25000 | 25mL |
4K-50000 | 50mL |
4K-250000 | 250mL |
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