基于非生物素微聚合物的檢測(cè)系統(tǒng)、信號(hào)強(qiáng)、背景低、靈敏度高。
與傳統(tǒng)基于親和素-生物素復(fù)合物檢測(cè)方法(例如,ABC試劑盒)相比,基于微聚合物的檢測(cè)是IHC檢測(cè)中較為先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)方法之一。相較于ABC法,微聚合物檢測(cè)具有顯著的優(yōu)勢(shì),例如在同一組織切片上進(jìn)行多抗原標(biāo)記(multiplexing),或樣本本身內(nèi)源性生物素水平較高等情況,使用微聚合物法進(jìn)行檢測(cè)更易獲得理想的染色結(jié)果。
該微聚合物檢測(cè)系統(tǒng)主要由酶復(fù)合物和二抗(可與一抗結(jié)合)聚合在一起組成。與使用酶標(biāo)二抗相比,這種聚合物形式可在靶標(biāo)蛋白染色位點(diǎn)引入更多的酶,使用底物顯色時(shí),可產(chǎn)生更強(qiáng)的信號(hào)。此外,ABC法需要二抗和親和素-生物素復(fù)合物單獨(dú)孵育(兩次孵育),而微聚合物法僅需一個(gè)孵育步驟,大大縮短了IHC的實(shí)驗(yàn)流程。
最初引入的微聚合物檢測(cè)系統(tǒng)是由葡聚糖或其類(lèi)似物組成。由于其體積較大,在某些組織中存在一些固有問(wèn)題。Vector Laboratories的ImmPRESS微聚合物系統(tǒng)經(jīng)過(guò)多重優(yōu)化,由體積較小的微聚合物組成,更容易滲透到樣本中,尤其是較厚不易著色的部位,可最大限度的避免空間位阻,與一抗進(jìn)行特異性結(jié)合。
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乳腺癌組織樣本: ? Estrogen Receptor(m), ImmPRESS Reagent(HRP; Universal),? ?Vector DAB(棕色), ? Cytokeratin AE1/AE3(m), VECTASTAIN ABC-AP Kit(Universal),? ?Vector Red(洋紅)。 | 乳腺癌組織樣本:
? Estrogen Receptor(m), ImmPRESS Reagent(HRP; Universal),? ?Vector NovaRED? HRP Substrate(紅色), ? CD34(m), ImmPRESS Reagent(HRP; Universal), Vector DAB+Ni? ?HRP Substrate(灰黑色)。 |
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小腸組織樣本:
? Neurofilament 200 kDa(m), ImmPRESS Reagent(HRP) Anti-Mouse? ?IgG, Vector VIP(紫色) , ? Desmin(m), ImmPRESS Reagent(HRP) Anti-Mouse IgG, Vector? ?SG(藍(lán)灰色)。 | 乳腺癌組織樣本:
? Estrogen Receptor(m), ImmPRESS Reagent(HRP; Universal),? ?Vector NovaRED?(紅色), ? CD34(m), VECTASTAIN ABC-AP Kit(Universal), Vector Blue(藍(lán)色)。 |
ImmPRESS? One-Step 一步法多聚物檢測(cè)系統(tǒng)(適用于單抗原檢測(cè))
ImmPRESS Polymer檢測(cè)系統(tǒng)
ImmPRESS聚合物試劑由高活性的過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶與經(jīng)預(yù)吸附、親和純化的二抗形成的微聚合物組合而成。這種獨(dú)特的微聚合物偶聯(lián)技術(shù)可使抗體與足夠的酶結(jié)合,并以最小空間分子形式與靶標(biāo)結(jié)合。由于ImmPRESS聚合物試劑提高了識(shí)別靶標(biāo)蛋白的概率,可獲得特異性結(jié)合、信噪比高以及低背景的高清晰染色結(jié)果,使其成為免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色的又一利器。
ImmPRESS HRP PLUS Polymer Kits
與non-PLUS ImmPRESS HRP Polymer Kits相比,ImmPRESS HRP PLUS Polymer Kits所含組分試劑更多,包含了完成IHC實(shí)驗(yàn)流程的一些其他輔助試劑。ImmPRESS HRP PLUS Polymer Kits無(wú)需實(shí)驗(yàn)者對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行過(guò)多優(yōu)化,其包含IHC實(shí)驗(yàn)必需的全套試劑,大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟。
ImmPRESS HRP PLUS Polymer Kits試劑盒組成:
-BLOXALL 內(nèi)源性酶封閉試劑
-2.5% 正常血清
-ImmPRESS HRP polymer reagent?
-ImmPACT DAB EqV底物(色原和稀釋液)
ImmPRESS VR Polymer Kits
此外,Vector Laboratories還提供預(yù)先經(jīng)交叉吸附的ImmPRESS VR (Veterinary Reagents) Kits,該試劑盒常用于基礎(chǔ)研究的動(dòng)物模型(如牛、山羊、綿羊、豬、馬、貓、狗、兔、大鼠、小鼠)中靶標(biāo)蛋白的診斷和檢測(cè),其內(nèi)源性組織的交叉反應(yīng)最小。
ImmPRESS Polymer Kits使用步驟
ImmPRESSOne-StepDoubleStainingPolymer Systems(適用于雙抗原染色)
ImmPRESS Duet Double Staining Polymer Systems
ImmPRESS Duet Double Staining Polymer Kits(雙抗原染色試劑盒)能夠在同一組織切片上對(duì)兩種不同的靶標(biāo)抗原進(jìn)行快速、清晰的定位和觀察。利用Vector公司獨(dú)特的ImmPRESS聚合物技術(shù),將高活性辣根過(guò)氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)酶聚合物與經(jīng)高度交叉預(yù)吸附、親和純化的二抗(鼠抗和兔抗)結(jié)合。然后將這些試劑以最優(yōu)稀釋度混合,最后形成穩(wěn)定的預(yù)稀釋、即用型HRP/AP形式的試劑。該試劑盒可與來(lái)源于小鼠和兔的一抗搭配使用,并可節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間、簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)步驟,一步即可完成雙抗原染色,大大提高了實(shí)驗(yàn)效率。為了獲得高靈敏度和雙抗原著色對(duì)比明顯的染色結(jié)果,該試劑盒包含兩種不同酶底物,ImmPACT DAB EqV(HRP,棕色)和ImmPACT Vector Red(AP,洋紅)底物。
ImmPRESS Duet Double Staining Polymer Kit還適用于非嚙齒動(dòng)物組織樣本的雙抗原染色。不論是在同一細(xì)胞的同一結(jié)構(gòu)中,對(duì)兩種靶標(biāo)抗原進(jìn)行共定位(不會(huì)重疊),還是區(qū)分不同的細(xì)胞區(qū)室或不同的細(xì)胞類(lèi)型中表達(dá)的抗原,使用該試劑盒均可獲得可靠且可重復(fù)的結(jié)果。
ImmPRESS Duet Double Staining Polymer Kit試劑盒組成:
? BLOXALL 內(nèi)源性酶封閉試劑
? 2.5% 正常馬血清
? ImmPRESS Duet HRP/AP Polymer Reagent ( Anti-Rabbit IgG and Anti-
?Mouse IgG混合物)?
? ImmPACT DAB EqV 底物 (HRP, 棕色)?
? ImmPACT Vector Red 底物 (AP, 品紅色)
ImmPRESS One-Step Double Staining Polymer Systems使用步驟
ImmPRESS Two-Step兩步法多聚物檢測(cè)系統(tǒng)(適用于單抗原染色)
ImmPRESS Excel Amplified Polymer Staining Systems
ImmPRESS Excel Amplified Peroxidase(HRP)Polymer染色系統(tǒng)是完整形式的染色試劑盒,可充分利用ImmPRESS HRP Polymer系統(tǒng)技術(shù)的所有優(yōu)勢(shì),操作簡(jiǎn)便快速且具有更高的靈敏度。
該檢測(cè)系統(tǒng)采用即用型(R.T.U)信號(hào)放大抗體,并搭配ImmPRESS Excel HRP Polymer試劑一起使用。這些試劑均經(jīng)過(guò)親和純化和多種屬交叉吸附處理,確??梢垣@得更高靈敏度和更低背景的染色結(jié)果。與其內(nèi)帶有的ImmPACT DAB EqV底物聯(lián)合使用,可產(chǎn)生清晰的深棕色反應(yīng)產(chǎn)物,這也是ImmPRESS/ImmPACT系列產(chǎn)品的
一大特色——超高靈敏度。
如果需要檢測(cè)的靶標(biāo)抗原表達(dá)較弱,在未知其表達(dá)水平的情況下,如基因敲入研究,或確定靶基因表達(dá)是否上調(diào)時(shí),推薦使用ImmPRESS Excel Amplified HRP Kits。該試劑盒檢測(cè)結(jié)果可靠、一致,試劑無(wú)需稀釋?zhuān)蟠罂s短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
ImmPRESS Excel Amplified Polymer Kits (Peroxidase) |
Anti-Rabbit IgG Anti-Mouse IgG |
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Colon:Anti-CD34 (m), ImmPRESS ExcelAmplified? Anti-Mouse IgG Staining Kit,ImmPACT DAB? EqV (brown), HematoxylinQS counterstain (blue). |
ImmPRESS Excel Amplified Staining Kit試劑盒組成:
? BLOXALL 內(nèi)源性酶封閉試劑
? 2.5% 正常馬血清
? Amplifier Antibody (goat anti-rabbit IgG 或 goat anti-mouse IgG)
?? ImmPRESS Excel Polymer檢測(cè)試劑 (horse anti-goat IgG)
? ImmPACT DAB EqV 底物 (色原和稀釋液)
ImmPRESS Two-Step Amplified Polymer Systems使用步驟
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