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單克隆抗體與多克隆抗體的區(qū)別

2022-08-15
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單克隆抗體和多克隆抗體,雖然只有一字之差,但是兩者的區(qū)別,還是比較大的,本篇欣欣就為各位科研的老師們整理單克隆抗體與多克隆抗體的區(qū)別,供大家參考使用。


單克隆抗體


特點:


不易產(chǎn)生批次間差異。

僅由一種抗體亞型組成(例如 IgG1、IgG2、IgG3)。如需使用二抗進行檢測,應(yīng)針對正確的亞類選擇抗體。


抗體制備:


技術(shù)要求較高。

應(yīng)用技術(shù)之前需接受專門培訓(xùn)。

需要花費較長時間制備雜交瘤細胞。


優(yōu)點:


制得的雜交瘤細胞為持續(xù)且可再生產(chǎn)的單克隆抗體來源,而且所有批次均相同,有助于提升實驗過程和實驗結(jié)果的一致性和標準化水平。


單克隆抗體只檢測每個抗原上的一個表位,因此具有以下優(yōu)點:


切片和細胞染色產(chǎn)生的背景信號更少。特異性地檢測一個靶表位,不易與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。

由于具有高特異性,單克隆抗體非常適于用作實驗中的一抗,其產(chǎn)生的背景染色信號通常顯著低于多克隆抗體。

相較于多克隆抗體,單克隆抗體的同質(zhì)性非常高。在相同的實驗條件下,單克隆抗體實驗之間的結(jié)果重現(xiàn)性非常高。

得益于其高特異性,單克隆抗體能夠在相關(guān)分子的混合物中(例如在親和純化過程中)極為高效地結(jié)合抗原。


缺點:


特異性過高,以致于無法進行跨物種的檢測。

與多克隆抗體相比,更易受化學(xué)處理造成的抗原表位丟失的影響。這可通過合并靶抗原相同的兩種或多種單克隆抗體進行補償(例如使用抗體組合試劑盒)。



多克隆抗體


特點:


識別任一抗原上的多個表位。所得血清為異質(zhì)性抗體混合物,其親和力各有不同。

多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。

通常使用多肽免疫原制備以獨有表位為靶標的多克隆抗體,尤其是針對高同源性的蛋白家族。



抗體制備:


制備成本低廉且制備速度較快。

制備過程比單克隆抗體簡單。


優(yōu)點:


多克隆抗體可識別任一抗原上的多個表位,因此具有以下優(yōu)點:


高親和性:由于靶蛋白上的多個表位能夠結(jié)合不止一個抗體分子,多克隆抗體可放大低表達水平靶蛋白的信號。但是,這會影響定量實驗(如流式細胞術(shù)實驗)結(jié)果的準確性。

可識別多個表位,有利于免疫沉淀 (IP) 和染色質(zhì)免疫沉淀 (ChIP) 實驗獲得更好的結(jié)果。

與單克隆抗體相比,對微小抗原變化(例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或者輕微變性)的包容性更強。

可識別與免疫原蛋白質(zhì)具有高度同源性的蛋白質(zhì),還可用于篩查非免疫原物種的靶蛋白。

通常是檢測變性蛋白質(zhì)的首選。

多表位通??商嵘龣z測的穩(wěn)定性。


缺點:


易產(chǎn)生批次間差異。

產(chǎn)生大量非特異性抗體,可能會在某些應(yīng)用中產(chǎn)生背景信號。

由于具有多個表位,檢測免疫原序列的交叉反應(yīng)性非常重要。

不適用于探測抗原的特定結(jié)構(gòu)域,因為抗血清通常會識別多個結(jié)構(gòu)域。


單克隆與多克隆抗體的主要區(qū)別總結(jié):


單克隆抗體
多克隆抗體
制備成本高昂制備成本低廉
應(yīng)用技術(shù)之前需接受專門培訓(xùn)制備技能要求不高
需要較長的時間制備雜交瘤細胞制備速度較快
產(chǎn)生大量特異性抗體產(chǎn)生大量非特異性抗體
僅識別一個抗原上的單一表位識別任一抗原上的多個表位
制得的雜交瘤細胞為持續(xù)且可再生產(chǎn)的單克隆抗體來源批次間可能存在差異
批次間無差異或差異較小-


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