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炎癥小體的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

2022-04-19
瀏覽次數(shù): 421

InvivoGen提供了用于炎癥小體研究的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)工具,并不斷擴(kuò)充這一連串的產(chǎn)品系列。人源單核細(xì)胞系THP-1由于表達(dá)高水平的NLRP3、ASC和pro-caspase-1而被廣泛用于炎癥小體的研究。為了幫助您評估特定炎癥小體在經(jīng)典和非經(jīng)典炎癥反應(yīng)中的作用,我們設(shè)計了THP1或RAW264.7衍生細(xì)胞,它們敲除(KO)或敲低了(def)NLRP3、ASC、 CASP-1、CASP-4、CASP-11、NLRC4和GSDMD的基因表達(dá)。此外,這些細(xì)胞可作為對照,應(yīng)用于篩選新療法上。這些細(xì)胞系的功能驗(yàn)證均使用了HEK-BlueTM IL-1β細(xì)胞來檢測生物活性 IL-1β 的釋放(可咨詢欣博盛生物索要相關(guān)資料)。


監(jiān)測NLRP3依賴性應(yīng)答

THP1-KO-NLRP3 Cells

THP1-KO-NLRP3細(xì)胞敲除了NLRP3基因的N端區(qū)域,此基因敲除通過了DNA測序、PCR和Western blot驗(yàn)證。這些細(xì)胞表達(dá)一個非活性NLRP3的C末端片段,因此,它們與尼日利亞霉素或氫氧化鋁孵育后,會使IL-1β的分泌和細(xì)胞焦亡的發(fā)生被阻斷。值得注意的是,在Poly(dA:dT)或大腸桿菌外膜囊泡(OMVs)的刺激下,IL-1β的分泌在cGAS-STING-NLRP3或CASP-4/5炎癥小體激活時受到嚴(yán)重?fù)p害。因此,THP1-KO-NLRP3細(xì)胞可以用來區(qū)分NLRP3和其他炎癥小體傳感器的激活。

炎癥小體的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號
THP1-KO-NLRP3 Cells3-7 x 10(6) cellsthp-konlrp3z
THP1-Null2 Cells3-7 x 10(6) cellsthp-nullz


NLRP3:一個具吸引力的藥物靶點(diǎn)

NLRP3的活化可由多種刺激物介導(dǎo),然而這種拮抗感染的進(jìn)化優(yōu)勢也可以是一種負(fù)擔(dān)。事實(shí)上,NLRP3與多種疾病有關(guān),如2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、阿爾茨海默病和癌癥,因此NLRP3成為了具吸引力的藥物研發(fā)靶點(diǎn) [34, 35] 。


監(jiān)測NLRC4依賴性應(yīng)答

THP1-KO-NLRC4 Cells& RAW-ASC KO-NLRC4 Cells

THP1-KO-NLRC4 細(xì)胞敲除NLRC4的核苷酸結(jié)合域(NDB),使得NLRC4蛋白無法為炎癥小體的組裝而聚合(見第9頁)。RAW-ASC KO-NLRC4細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)鼠源ASC基因(一般在

RAW264.7細(xì)胞中缺失[36]),并經(jīng)DNA測序、PCR和Western blot證實(shí)敲除了雙等位基因NLRC4。THP1-KO-NLRC4和RAWASC-KO-NLRC4細(xì)胞在分別與Needle-Tox和Rod-Tox孵育時,顯示了受損的IL-1β分泌和細(xì)胞焦亡。重要的是,兩種KO細(xì)胞系對其他炎癥誘導(dǎo)劑(如Poly(dA:dT))的應(yīng)答僅受到輕微影響。

炎癥小體的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號
THP1-KO-NLRC4 Cells3-7 x 10(6) cellsthp-konlrc4z
RAW-ASC KO-NLRC4 Cells3-7 x 10(6) cellsraw-konlrc4


監(jiān)測ASC依賴性應(yīng)答

THP1-KO-ASC Cells

THP1-KO-ASC細(xì)胞經(jīng)DNA測序、PCR和Western blot證實(shí),具有ASC基因的雙等位基因KO。這些細(xì)胞可以用來確定炎癥小體是否需要ASC來激活。值得注意的是,它們對NLRP3或CASP-4誘導(dǎo)劑的應(yīng)答嚴(yán)重受損。

炎癥小體的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號
THP1-KO-ASC Cells3-7 x 10(6) cellsthp-koascz


監(jiān)測CASP-1依賴性應(yīng)答

THP1-defCASP1 Cells

THP1-defCASP1細(xì)胞比其THP1-Null母細(xì)胞系表達(dá)約少7倍的caspase-1,強(qiáng)烈欠缺capase-1活性。這細(xì)胞系有助于篩選新型炎癥小體誘導(dǎo)劑。

炎癥小體的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號
THP1-defCASP1 Cells3-7 x 10(6) cellsthp-dcasp1
THP1-Null Cells3-7 x 10(6) cellsthp-null


研究特定炎癥小體的工具

單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是處于免疫防御前線的天然細(xì)胞,因此是研究炎癥小體信號最廣泛使用的細(xì)胞類型。

骨髓源性巨噬細(xì)胞(BMDMs)是經(jīng)過體外分化的原代細(xì)胞。

THP-1 細(xì)胞系是一種表達(dá)高水平NLRP3、ASC和pro-caspase-1的人源單核細(xì)胞系 [37] 。

敲除(KO)和敲低(KD)用于研究特定的基因功能,以及它們是否能被另一個基因所補(bǔ)償。

化學(xué)抑制劑可以輔助KO/KD細(xì)胞系工具。這些小分子雖然具阻斷蛋白的功能,但仍可以允許蛋白組裝成大分子復(fù)合物。


監(jiān)測CASP-4依賴性應(yīng)答

THP1-KO-CASP4 Cells

THP1-KO-CASP4細(xì)胞經(jīng)DNA測序、PCR和Western blot驗(yàn)證,具有CASP4基因的雙等位基因KO。這些細(xì)胞與預(yù)期中一樣,對NLRP3誘導(dǎo)劑(如尼日利亞霉素)的應(yīng)答不受影響,而對CASP-4誘導(dǎo)劑(如轉(zhuǎn)染的LPS)的應(yīng)答則受到阻礙。盡管CASP4基因已完全敲除,但可能由于被CASP-5部分激活,這些細(xì)胞在轉(zhuǎn)染LPS后仍分泌可檢測水平的IL-1β。

炎癥小體的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)


InvivoGen還提供從RAW-ASC細(xì)胞系產(chǎn)生的 RAW-ASC KO-CASP11細(xì)胞。這些細(xì)胞具有CASP-11基因的雙等位基因KO,它們對非經(jīng)典炎癥小體誘導(dǎo)物(如轉(zhuǎn)染的LPS或大腸桿菌OMVs)的應(yīng)答受損。

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號
THP1-KO-CASP4 Cells3-7 x 10(6) cellsthp-kocasp4z
RAW-ASC KO-CASP11 Cells3-7 x 10(6) cellsraw-kocasp11


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