轉(zhuǎn)染是將外源的DNA或者RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞，是生物科學(xué)研究中經(jīng)常用到的一種實(shí)驗(yàn)手段，可以分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。Mirus有20多年轉(zhuǎn)染試劑生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，可以提供廣譜的轉(zhuǎn)染試劑，也可以提供針對不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染試劑。本文為大家介紹 MIR 2300?轉(zhuǎn)染金牌產(chǎn)品-----TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑。
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?● 產(chǎn)品介紹??
Mirus TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的廣譜試劑，可以在許多哺乳動物細(xì)胞類型（包括原代細(xì)胞）中提供高效的質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染。?Mirus TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑低毒、且兼容多種血清，無需更換培養(yǎng)基。Mirus?TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑既適用于瞬時轉(zhuǎn)染，也適用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染?？捎糜诟杉?xì)胞轉(zhuǎn)染，基因表達(dá)，病毒生產(chǎn)，shRNA表達(dá)和啟動子分析等實(shí)驗(yàn)。 ?
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?●?產(chǎn)品特性??
● 廣譜DNA傳遞-利用Mirus TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑可轉(zhuǎn)染各種細(xì)胞。
● 低細(xì)胞毒性-Mirus TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑能夠維持細(xì)胞密度，減少實(shí)驗(yàn)偏差。
● 高效傳遞-Mirus TransIT-LT1轉(zhuǎn)染效率高。
● 適用單質(zhì)?；蚨噘|(zhì)粒-Mirus TransIT-LT1適用于病毒生產(chǎn)等應(yīng)用。
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?● Mirus TransIT?-LT1轉(zhuǎn)染試劑常見包裝??
MIR 2304 | TransIT?-LT1 Transfection Reagent | 0.4 ml |
MIR 2300 | TransIT?-LT1 Transfection Reagent | 1 ml |
MIR 2305 | TransIT?-LT1 Transfection Reagent | 5 x 1 ml |
MIR 2306 | TransIT?-LT1 Transfection Reagent | 10 x 1 ml |
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?● Mirus TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)???
(1)?使用TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑高效轉(zhuǎn)染iCell?心肌細(xì)胞。
iCell?心肌細(xì)胞在2萬個細(xì)胞/孔的涂有0.1%的明膠的96孔組織培養(yǎng)板上。在細(xì)胞解凍恢復(fù)后，細(xì)胞用100 ng/孔的pMAXGFP (Lonza)轉(zhuǎn)染，使用TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑，根據(jù)制造商的說明，試劑與DNA的比例為2:1。轉(zhuǎn)染后3天使用Olympus IX71?倒置顯微鏡拍攝熒光圖像。
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(2)?比較在多種細(xì)胞類型中使用TransIT-LT1試劑和FuGENE?6的熒光素酶表達(dá)。
根據(jù)行業(yè)公認(rèn)的檢測協(xié)議，使用3μl的TransIT-LT1或FuGENE?6試劑，在12孔板上每孔用1μg熒光素酶表達(dá)載體對所示細(xì)胞株進(jìn)行重復(fù)轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24小時收集細(xì)胞并檢測熒光素酶活性。
(3)?通過Trans-LT1反向轉(zhuǎn)染人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)的異常轉(zhuǎn)染效率
使用TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑反向轉(zhuǎn)染1.3 x 106 iPS細(xì)胞與ZsGreen表達(dá)質(zhì)粒(Clontech)。使用12μl的TransIT-LT1轉(zhuǎn)染試劑在6孔板上進(jìn)行反轉(zhuǎn)染，以遞送4μg的DNA(試劑:DNA=3:1)。轉(zhuǎn)染48小時后觀察細(xì)胞，用
Olympus IX71?倒置顯微鏡在10X鏡下成像。圖像為(A)相位對比，(B)綠色熒光。轉(zhuǎn)染48小時后，細(xì)胞在Accuri?細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測。直方圖(C)顯示了未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(黑線)與使用TransIT-LT1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(綠線)。
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? 轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)操作流程??
轉(zhuǎn)染流程包括培養(yǎng)細(xì)胞，制備TransIT-LT1試劑和DNA復(fù)合物和將復(fù)合物添加到完全生長培養(yǎng)基中的細(xì)胞中，具體操作流程和相關(guān)問題解決方案可參考說明書。（https://www.mirusbio.com/products/transfection/transit-lt1-transfection-reagent#product:MIR%202300）
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