PUREfrex???——重組無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)
PUREfrex?是一種基于PURE系統(tǒng)技術(shù)新開發(fā)的體外轉(zhuǎn)錄/翻譯偶聯(lián)系統(tǒng)，與S30體外翻譯系統(tǒng)不同，PUREfrex?是重組無細(xì)胞蛋白合成系統(tǒng)，反應(yīng)系統(tǒng)由蛋白質(zhì)、核糖體、氨基酸和NTPs組成。只需將編碼感興趣蛋白質(zhì)的DNA(或mRNA)與試劑盒中溶液I、II和III混合，37℃孵育反應(yīng)數(shù)小時(shí)，即可完成蛋白質(zhì)合成。構(gòu)成PUREfrex?試劑盒的蛋白質(zhì)、核糖體和tRNA的制備方法較原PURE體系有所改進(jìn)，減少了與蛋白質(zhì)合成無關(guān)的污染物質(zhì)。且PUREfrex?試劑盒中所含的翻譯因子和其他蛋白均不包含標(biāo)簽序列，后續(xù)可添加任何標(biāo)簽來純化和檢測(cè)合成的蛋白質(zhì)。
〉參考文獻(xiàn)
Shimizu et al. (2001) Nat. Biotechnol., vol. 19, p. 751. PubMed ID:?11479568
Shimizu et al. (2005) Methods, vol. 36, p. 299. PubMe ID:?16076456
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〉產(chǎn)品特點(diǎn)
●?消除了細(xì)胞提取物中的雜蛋白，合成的表達(dá)產(chǎn)物分辨率更高；
●?可以同時(shí)加入多種模板進(jìn)行反應(yīng)，以合成Fab及多聚體；
●?可直接使用PCR產(chǎn)物來作為模板DNA；
●?單位體積內(nèi)合成的蛋白量幾乎恒定；
●?操作簡(jiǎn)便，37℃數(shù)小時(shí)即可合成；
●?所有的蛋白成分均不包含標(biāo)簽序列，可使用任何標(biāo)簽來純化和檢測(cè)合成的蛋白質(zhì)；
●?可合成活細(xì)胞難以合成的強(qiáng)毒性蛋白。
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〉PUREfrex?不同版本的選擇?
PUREfrex?2.0?- 蛋白質(zhì)合成量更高，大大降低了RNase和?-半乳糖苷酶的污染，并將每1μL反應(yīng)混合物的脂多糖(LPS)水平降低至約0.1 EU。
PUREfrex?2.1?-??2.1版本試劑盒以2.0版本為基礎(chǔ)，未預(yù)混還原劑。主要用于合成含有二硫鍵的靶蛋白。
PUREfrex?1.0?- 蛋白質(zhì)合成量少于2.0和2.1版本，但1.0版本反應(yīng)組分的完整信息已公開。
PUREfrex?1.0 Custom?- 廠家可提供基于PUREfrex?1.0試劑盒的定制產(chǎn)品。
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〉PUREfrex?2.0試劑盒
PUREfrex?2.0是PUREfrex??1.0的優(yōu)化版。大大減少了RNase和β-半乳糖苷酶的污染，此外，每1μL反應(yīng)混合物的脂多糖(LPS)水平降低至約0.1 EU。與PUREfrex?1.0相比，蛋白質(zhì)合成量提高了2-10倍。
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圖1. 合成原核及真核生物蛋白質(zhì)的結(jié)果顯示：與PUREfrex?1.0相比，使用PUREfrex?2.0合成時(shí)，以上6種蛋白質(zhì)的合成量都有增加。
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圖2. 與原始PURE系統(tǒng)相比，PUREfrex?2.0大大減少了RNase和β-半乳糖苷酶的污染，此外，每1μL反應(yīng)混合物的脂多糖(LPS)水平降低至約0.1 EU。PUREfrex?2.0組分的改進(jìn)純化大大降低了污染物的水平。
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〉PUREfrex?2.0試劑盒組成
試劑 | 體積 | 組分說明 |
Solution?I | 125 μL | 氨基酸, NTPs, tRNAs和酶底物等 |
Solution?II | 12.5 μL | 蛋白質(zhì)（30%甘油緩沖液中） |
Solution?III | 25 μL | 核糖體（20 μM） |
DHFR DNA | 10 μL | 含有大腸桿菌二氫葉酸還原酶(DHFR)基因的PCR產(chǎn)物作為陽性對(duì)照。(20 ng /μL) |
產(chǎn)品列表
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 總反應(yīng)體積 |
試劑盒 |
PUREfrex?2.0 | GFK-PF201-0.25-EX | 250 μL |
GFK-PF201-0.25-5-EX | 250 μL×5 |
PUREfrex?2.1 | GFK-PF213-0.25-EX | 250 μL |
GFK-PF213-0.25-5-EX | 250 μL×5 |
PUREfrex?1.0 | GFK-PF001-0.25-EX | 250 μL |
GFK-PF001-0.25-EX | 250 μL×5 |
PUREfrex?補(bǔ)充試劑（請(qǐng)根據(jù)用途選擇蛋白質(zhì)合成反應(yīng)液和添加劑） |
DnaK Mix | GFK-PF003-0.5-EX | 用于500ul的反應(yīng)混合物 |
GroE Mix | GFK-PF004-0.5-EX | 用于500ul的反應(yīng)混合物 |
DsbC Set | GFK-PF005-0.5-EX | 用于500ul的反應(yīng)混合物 |
PDI Set | GFK-PF006-0.5-EX | 用于500ul的反應(yīng)混合物 |
EF-P | GFK-PFS052-0.5-EX | 用于500ul的反應(yīng)混合物 |
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