| 陽(yáng)性對(duì)照偏低或低吸光度 |
| 原因 | 解決方案 |
| 試劑未平衡至室溫 | ●?實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒從冰箱取出平衡至室溫 |
| 檢測(cè)體積偏小 | ●?確保取液時(shí)，正確使用移液器
●?檢查移液器吸液管道是否阻塞
●?校正移液器 |
| 孵育時(shí)間過(guò)短 | ●?使用計(jì)時(shí)器，準(zhǔn)確孵育時(shí)間 |
| 底物受污染 | ●?使用新配制的試劑，重新實(shí)驗(yàn) |
| 包裝袋中有濕氣 | ●?檢查袋中是否有干燥劑
●?封好未使用的孔條
●?首次開(kāi)袋時(shí)，應(yīng)標(biāo)上日期 |
| 樣本中有抑制劑 | ●?疊氮鈉會(huì)抑制?HRP?酶的活性 |
| 洗滌步驟過(guò)于劇烈 | ●?降低洗滌系統(tǒng)的壓力 |
| 試劑在使用前未混勻 | ●?使用前務(wù)必混勻試劑 |
| 實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,?微孔變干燥 | ●?實(shí)驗(yàn)過(guò)程勿中斷，需連續(xù)完成所有實(shí)驗(yàn)步驟 |
| 未加終止液 | ●?加入終止液，增強(qiáng)顏色反應(yīng)的強(qiáng)度，穩(wěn)定最終的顏色反應(yīng) |
| 結(jié)合物工作液濃度偏低 | ●?準(zhǔn)確稀釋制備工作液，按說(shuō)明書(shū)建議操作 |
| 讀數(shù)時(shí)使用的濾光片不正確 | ●?使用?TMB?底物時(shí)，450nm?波長(zhǎng)下讀數(shù)，650nm?波長(zhǎng)下讀取校正讀數(shù) |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線良好但樣本無(wú)檢測(cè)信號(hào) |
| 原因 | 解決方案 |
| 樣本中無(wú)待檢物 | ●?設(shè)置對(duì)照，重新實(shí)驗(yàn) |
| 樣本中其他物質(zhì)影響或掩蓋檢測(cè) | ●?作適當(dāng)稀釋，降低其他物質(zhì)干擾或作系列稀釋?,?檢測(cè)回收率 |
| 樣本中檢測(cè)物過(guò)高?, Hook?效應(yīng)導(dǎo)致假陰性 | ●?適當(dāng)倍數(shù)稀釋樣本，檢測(cè)物濃度盡量在檢測(cè)試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi) |
| 假陽(yáng)性反應(yīng) |
| 原因 | 解決方案 |
| 洗滌不充分 | ●?使用前須檢查洗板機(jī)是否正常工作 |
| 洗板機(jī)管道阻塞 | ●?須經(jīng)常維護(hù)洗板機(jī) |
微孔板受酶結(jié)合物污染
加結(jié)合物時(shí)?,?灑在微孔邊緣
結(jié)合物污染了底物溶液 | ●?小心向微孔加入結(jié)合物，加入微孔底部中央，避免與孔壁和邊緣接觸 |
| 檢測(cè)樣本中含有紅細(xì)胞 | ●?離心 |
| 微孔中液體揮發(fā) | ●?用封板膠密封反應(yīng)孔?,?置于濕盒內(nèi) |
| 結(jié)合物工作液濃度過(guò)高 | ●?按說(shuō)明書(shū)稀釋 |
| 孵育溫度過(guò)高 | ●?降低溫度 |
| 重復(fù)性較差 |
| 原因 | 解決方案 |
| 微孔中有小氣泡 | ●?用針尖撓破氣泡 |
| 分液誤差 | ●?檢查分液裝置 |
| 試劑未混勻 | ●?確保充分混勻試劑 |
| 洗滌不充分 | ●?確保所有微孔都抽吸干凈，并及時(shí)填滿微孔 |
| 微孔被吸頭劃破 | ●?洗液或注液時(shí)，小心操作 |
| 樣本中有雜質(zhì)或沉淀物 | ●?使用前須離心 |
| 孵育溫度不穩(wěn)定 | ●?在溫度穩(wěn)定的孵育箱中進(jìn)行孵育 |
| 使用了用過(guò)的封板膠紙 | ●?每次須使用新的封板膠紙封閉反應(yīng)孔 |
| 高背景或陰性對(duì)照值偏高 |
| 原因 | 解決方案 |
| 陰性對(duì)照孔被陽(yáng)性對(duì)照或樣本污染 | ●?洗滌時(shí)，勿將洗液溢出板孔外
●?確保洗滌時(shí)每個(gè)孔都充滿緩沖液，洗滌后確保將殘余液體從孔中移除
●?在微孔中央吸取樣本或試劑時(shí)，避免槍頭與內(nèi)壁或邊緣接觸
●?重新洗滌 |
| 抗體非特異性結(jié)合 | ●?封閉液不適合，更換封閉液
●?預(yù)處理微孔以防止抗體非特異性結(jié)合 |
| 酶結(jié)合物濃度過(guò)高 | ●?檢查濃縮酶結(jié)合物是否按照說(shuō)明書(shū)要求正確稀釋 |
| 孵育溫度過(guò)高 | ●?抗體在適當(dāng)溫度下具有最適結(jié)合活性，確保孵育在說(shuō)明書(shū)指定溫度下進(jìn)行 |
| 緩沖液被污染 | ●?準(zhǔn)備新的緩沖液，進(jìn)行滅菌過(guò)濾 |
| 孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | ●?按說(shuō)明書(shū)規(guī)定時(shí)間孵育，或縮短孵育的時(shí)間 |
| 底物在使用前曝光 | ●?應(yīng)避光保存于暗處 |
| 讀板前停留時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | ●?加終止液后?3?分鐘內(nèi)讀數(shù) |
| 讀數(shù)時(shí)使用的濾光片不正確 | ●?檢查濾光片，?TMB?底物推薦在?450nm?下讀數(shù) |
| 未加入終止液 | ●?如底物反應(yīng)未終止，顏色會(huì)繼續(xù)生成 |
| 標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳 |
| 原因 | 解決方案 |
| 倍比系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，未混勻 | ●?加入標(biāo)準(zhǔn)品和稀釋液后，須混勻 |
| 過(guò)早稀釋 | ●?在剛要使用時(shí)，準(zhǔn)備試劑立即加入微孔 |
| 洗滌不充分 | ●?確保所有微孔都抽吸干凈，并及時(shí)填滿微孔 |
| 讀數(shù)時(shí)間超出了顯色所需時(shí)間 | ●?讀數(shù)時(shí)間在說(shuō)明書(shū)推薦的時(shí)間內(nèi)，注意觀察顏色變化 |
| 體積不正確 | ●?校正移液器 |
| 移液器使用不當(dāng) | ●?快速等量地將吸液管中的液體分配到各微孔中，使用校正過(guò)的移液器 |
| 整塊板產(chǎn)生陽(yáng)性?OD?值或整個(gè)板顯藍(lán)色 |
| 原因 | 解決方案 |
| 洗滌液體積不足或底物被殘留于孔低的結(jié)合物所污染 | ●?洗滌時(shí)，緩沖液充滿至孔邊緣，但要確保不能溢出孔外 |
| 結(jié)合物濃度過(guò)高 | ●?檢查是否按照說(shuō)明書(shū)推薦比例稀釋 |
| 血清中有血清因子 | ●?勿加熱血清 |
| 底物容器不潔凈 | ●?用酸清洗容器瓶，用蒸餾水沖洗 |
| 底物孵育時(shí)，微孔板曝光 | ●?加底物時(shí)，立即將板置于暗處 |
| 整塊板?OD?值偏低 |
| 原因 | 解決方案 |
| 顯色時(shí)間不足 | ●?適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間 |
| 孵育溫度偏低 | ● 36?度為最適反應(yīng)溫度?(?欣博盛?ELISA?試劑盒?) |
| 未加終止液 | ●?加入終止液，增強(qiáng)顏色反應(yīng)的強(qiáng)度，穩(wěn)定最終的顏色反應(yīng) |
| 部分原因也可參考【陽(yáng)性對(duì)照偏低或低吸光度】 |
| 顯色緩慢 |
| 原因 | 解決方案 |
| 樣本未置于室溫 | ●?實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將樣本平衡至室溫 |
| 酶結(jié)合物活性減弱 | ●?檢測(cè)稀釋度 |
| 酶活性受到抑制如疊氮鈉 | ●?避免使用不當(dāng)?shù)姆栏瘎?/span> |
| 顯色溫度不適當(dāng) | ●?按說(shuō)明書(shū)操作 |
| 邊緣效應(yīng) |
| 原因 | 解決方案 |
| 蒸發(fā) | ●?各操作步驟間，須使用封板膠密封反應(yīng)板 |
| 溫度不均勻 | ●?在孵育時(shí)，將板放于?36?℃孵育箱中，避免溫度波動(dòng)。勿疊放反應(yīng)板防止受熱不均 |