細(xì)胞培養(yǎng)于懸滴(hanging drop), 自組裝形成球狀細(xì)胞簇。 Cayman采用3D Biomatrix公司的3D細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)，開發(fā)出了兩款全新的試劑盒用于研究Perfecta3D?培養(yǎng)板上的球狀體(spheroid)細(xì)胞。即Perfecta3D?細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒及Perfecta3D?細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒，可快速精準(zhǔn)的檢測(cè)球狀體的一些基本細(xì)胞過程。
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研究復(fù)雜的細(xì)胞和組織，及其信號(hào)傳導(dǎo)與調(diào)控可不是件容易事。而模擬細(xì)胞或組織環(huán)境，建立最接近體內(nèi)天然條件的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)同樣困難。這就是3D細(xì)胞培養(yǎng)所面臨的挑戰(zhàn)，3D培養(yǎng)系統(tǒng)旨在更好的模擬細(xì)胞的體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境。近來越來越多的證據(jù)表明，3D細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)比傳統(tǒng)2D培養(yǎng)系統(tǒng)更貼近體內(nèi)的生理?xiàng)l件。美國(guó)3DBiomatrix公司生產(chǎn)的Perfecta3D?懸滴板是一個(gè)新的三維細(xì)胞培養(yǎng)平臺(tái)，能夠在多孔板模式中形成大小均勻的球狀體懸滴；這種懸滴是細(xì)胞自組裝形成的球狀細(xì)胞簇，是三維（3D）細(xì)胞培養(yǎng)和篩選中研究的最有利的模型之一。同其他類型的3D支架和水凝膠等方法相比，這種球狀體具有簡(jiǎn)單性，可重復(fù)性以及生理組織的相似性，能模擬組織腫瘤固有的代謝（氧氣、二氧化碳、養(yǎng)分、廢物）和增殖梯度變化。作為優(yōu)良的生理腫瘤模型可以提供比2D細(xì)胞培養(yǎng)更可靠的結(jié)果。?
圖1. Perfecta3D?懸滴培養(yǎng)板促進(jìn)細(xì)胞球體在懸滴中的培養(yǎng)。用移液器將細(xì)胞懸液加入每個(gè)孔，細(xì)胞自組裝形成的球狀細(xì)胞簇。
應(yīng)用一. 細(xì)胞活性檢測(cè)
?在細(xì)胞研究中，對(duì)細(xì)胞活性及細(xì)胞毒理的檢測(cè)是一項(xiàng)基本的細(xì)胞學(xué)技術(shù)，通常采用WST-1法。WST-1是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的可溶性formazan鹽。Formazan產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量及活性成正比。
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Cayman開發(fā)的Perfecta3D?細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：600990）, 提供3D細(xì)胞培養(yǎng)板、WST-1試劑、電子媒介體溶液（Electron Mediator Solution）以及分析用的圓底板。如圖2所示，HEK293細(xì)胞以不同細(xì)胞密度培養(yǎng)于懸滴中，設(shè)置Vehicle對(duì)照以及逐漸增加Triton X-100濃度的實(shí)驗(yàn)組（處理1小時(shí)）。然后轉(zhuǎn)移細(xì)胞至圓底板，與WST-1溶液孵育，最后在450nm讀數(shù)。OD值隨細(xì)胞數(shù)升高，隨Triton X-100濃度的升高而降低。?
圖2. 起始細(xì)胞數(shù)量對(duì)450nm吸光度的影響。HEK293細(xì)胞以不同起始細(xì)胞密度加入3D培養(yǎng)板，將培養(yǎng)板移入37度CO2孵育箱中。4天后，細(xì)胞經(jīng)Vehicle, 0.001%或0.01% Triton X-100處理1小時(shí)，然后轉(zhuǎn)移至圓底板，每孔加入WST-1試劑。細(xì)胞于37度孵育3.5小時(shí)后，于450nm測(cè)定吸光度。
應(yīng)用二. 細(xì)胞毒性檢測(cè)?
細(xì)胞膜完整性的喪失是細(xì)胞毒性的表現(xiàn)形式之一，導(dǎo)致細(xì)胞的滲漏。LDH是一個(gè)可溶性的胞漿酶，可從受損細(xì)胞釋放到培養(yǎng)基中，因此被用作細(xì)胞溶解、細(xì)胞毒性以及細(xì)胞活性等的標(biāo)志分子。Cayman開發(fā)的Perfecta3D?細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)：601050）提供3D細(xì)胞培養(yǎng)板以及檢測(cè)LDH的必需試劑。細(xì)胞培養(yǎng)于懸滴中，通常含40-50ul的培養(yǎng)基，如要處理細(xì)胞，可移出10ul培養(yǎng)基，加入含有測(cè)試化合物的替換培養(yǎng)基。進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)時(shí)，可移出10ul培養(yǎng)基，然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至標(biāo)準(zhǔn)的96孔板，用LDH試劑進(jìn)行檢測(cè)。490nm讀數(shù)，吸光度與LDH濃度線性相關(guān)（圖3）。
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圖3. LDH標(biāo)準(zhǔn)曲線。LDH標(biāo)準(zhǔn)品溶于不含F(xiàn)BS的RPMI 1640中，然后每孔加入100ul的反應(yīng)液，室溫孵育30分鐘。