酶聯(lián)免疫斑點檢測（Enzyme-Linked Immunospot Assay, Elispot）結(jié)合了Elisa技術(shù)和細胞培養(yǎng)技術(shù)，在單細胞水平監(jiān)測細胞因子的分泌情況。其原理是用Elispot板上捕獲抗體特異性結(jié)合細胞所分泌的因子，然后用斑點的形式呈現(xiàn)出來的一種方法。Mabtech的Elispot在全球的質(zhì)量和性價比屈指可數(shù)。

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1.酶聯(lián)免疫斑點檢測方法有如下優(yōu)點：

1.1?靈敏度高，可以達到1/1000000,是非常靈敏的檢測手段。比傳統(tǒng)elisa要高2到3個數(shù)量級。

1.2?適合用于高通量篩選。分離的細胞不需要進行體外擴增，實驗人員能夠在同一次實驗進行多塊板的操作。

1.3?單細胞水平的檢測，Elispot的技術(shù)能夠檢測到單個細胞分泌細胞因子的情況。

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實驗步驟：?

2.1 Mabtech的Elispot是在底物有pvdf膜的96孔板上實驗。

分為兩種板，一種需要客戶自己包板的basic系列，另一種是已經(jīng)包被好捕獲抗體的pro和plus系列。

2. 2?在mabtech的elispot的板上加入細胞和各種刺激物共培養(yǎng)。在抗原特異性或者非特異性有絲分裂的影響下，數(shù)小時內(nèi)，細胞就可以分泌各種細胞因子。

2.3?分泌的細胞因子能夠被板上的包被抗體捕獲，洗去板上的細胞。

2.4?加入生物素化的檢測抗體能夠和特異性的分泌因子結(jié)合。

2.5 Mabtech能夠提供兩種顯色系統(tǒng)，HRP和ALP。針對hrp顯色體系，加入辣根過氧化物標(biāo)記的鏈霉親和素。針對ALP顯色體系，加入堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉親和素。

兩者的區(qū)別在于，ALP顯色時間較長，但是斑點持久，實驗完成后，斑點可以一直保存在膜上，隨時可以觀察。HRP系統(tǒng)顯色時間較短，但是斑點在膜上很快會褪色，不利于長期保存。Mabtech建議客戶可以選擇ALP顯色系統(tǒng)。

其原理見圖1：

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圖1 ELISPOT流程示意圖

2.6?每一個斑點都對應(yīng)一個分泌該因子的細胞，通過Elispot讀板儀計算每孔中的斑點數(shù)。Mabtech最新推出的的IRIS，與其他品牌的酶聯(lián)斑點儀器相比，

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IRIS具有如下優(yōu)點：

2.6.1?操作簡便，客戶經(jīng)過1-2個小時培訓(xùn)，能夠熟練操作系統(tǒng)。

2.6.2?通過構(gòu)建數(shù)學(xué)模型對每個點進行計算，使計數(shù)更加客觀。

2.6.4 IRIS還能夠用于熒光酶聯(lián)斑點實驗（fluorospot）結(jié)果的檢測，且目前最多能夠進行4種熒光的分析?；趯γ總€點3d立體分析，能夠準確定位每個斑點的中心，有效計入每個實際的斑點，去掉非特異性斑點。

3. Elispot的應(yīng)用和熱銷產(chǎn)品

3.1.?疫苗研發(fā)?很多疫苗研發(fā)的客戶會選擇酶聯(lián)免疫斑點實驗（Elispot）進行細胞情況的分析，比較熱銷的產(chǎn)品時人的IFN gamma，il-2和igG等指標(biāo)。

3.2.?細胞治療領(lǐng)域 通過Elispot試劑盒能夠靈敏地監(jiān)測免疫反應(yīng)。主要的熱銷指標(biāo)有：human IFN-gamma, Granzyme B，或者是TNF-alpha，IL-12/23等指標(biāo)。

4.?當(dāng)然如果有Flurospot可以一起檢測以上幾個指標(biāo)，實驗變得更加的簡單和快速。Fluorospot還有其他的應(yīng)用。

4.1?抗體亞型鑒定?Mabtech新推出的小鼠抗體亞型鑒定試劑盒，基于Elispot，快速鑒定IgG亞型。

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