◆?人IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot?PLUS和IFN-γ?SARS-CoV-2 ELISpot PLUS試劑盒

IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot?PLUS試劑盒可用于對(duì)SARS-CoV-2多肽應(yīng)答中能夠分泌干擾素γ（IFN-γ）、白介素2（IL-2）細(xì)胞因子或同時(shí)分泌這兩種細(xì)胞因子（FluoroSpot）的細(xì)胞進(jìn)行定量，IFN-γ?SARS-CoV-2 ELISpot PLUS試劑盒（ALP）僅可對(duì)能夠分泌干擾素γ（IFN-γ）的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。FluoroSpot分析方法是對(duì)ELISpot分析方法的一種創(chuàng)新性發(fā)展，其最大的優(yōu)勢(shì)是可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)。FluoroSpot使用熒光法進(jìn)行檢測(cè)，在結(jié)果讀取時(shí)Mabtech推薦使用配有過(guò)濾器的自動(dòng)FluoroSpot讀板儀，使用激發(fā)波490 nm/發(fā)射波510 nm（FITC）檢測(cè)490試劑，使用激發(fā)波550 nm/發(fā)射波570 nm（Cy3）檢測(cè)550試劑，同時(shí)過(guò)濾器應(yīng)該具有高度的特異性，以避免滲色偽像。分泌兩種細(xì)胞因子的細(xì)胞由計(jì)算機(jī)處理的覆蓋圖模式識(shí)別。

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??試劑盒組分

人IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot?PLUS試劑盒

● 預(yù)包被有單克隆捕獲抗體的低熒光板

●?SARS-CoV-2 S2 N定義肽庫(kù)、SARS-CoV-2 S1蛋白掃描肽庫(kù)

●?單克隆檢測(cè)抗體

●?共軛于熒光基團(tuán)的輔助試劑

●?熒光增強(qiáng)劑

●?用于共刺激的CD28單克隆抗體

人IFN-γ?SARS-CoV-2 ELISpot PLUS試劑盒（ALP）

●?預(yù)包被單克隆抗體的ELISpot可拆板

●?SARS-CoV-2 S2 N定義肽庫(kù)、SARS-CoV-2 S1蛋白掃描肽庫(kù)

●?生物素化的檢測(cè)抗體

●?鏈霉親和素- ALP

●?即用型TMB底物

另外，Mabtech還提供了人T細(xì)胞的多克隆抗體（mAb CD3-2）作為細(xì)胞因子分泌的陽(yáng)性對(duì)照。

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??產(chǎn)品特色

●?方便快速

●?靈敏度高

●?穩(wěn)定性好

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??應(yīng)用實(shí)例

使用IFN-γ/IL-2 FluoroSpot和IFN-γ?ELISpot對(duì)SARS-CoV-2 S1 S2 N定義肽庫(kù)進(jìn)行驗(yàn)證。SARS-CoV-2 S1 S2 N定義肽庫(kù)包含41條來(lái)自人類SARS-CoV-2病毒刺突蛋白（spike protein，S）和核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein，N）的多肽，可對(duì)能夠特異性識(shí)別刺突蛋白（Spike protein, S）和核衣殼蛋白（Nucleocapsid protein, N）的淋巴細(xì)胞進(jìn)行定量。

用Mabtech's SARS-CoV-2 S1 S2 N?肽庫(kù)對(duì)來(lái)自3例先前經(jīng)PCR證實(shí)為SARS-CoV-2陽(yáng)性患者的外周血單核細(xì)胞（PBMC）及未感染COVID-19健康人體內(nèi)的外周血單核細(xì)胞（PBMC）進(jìn)行刺激（每孔250,000?個(gè)細(xì)胞），植物血凝素（PHA）刺激的細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照（每孔50000個(gè)細(xì)胞），未刺激的細(xì)胞作為陰性對(duì)照（每孔250,000?個(gè)細(xì)胞）。Mabtech IRIS通過(guò)使用IFN-γ/IL-2 FluoroSpot?對(duì)T細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)行分析。

人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot結(jié)果。使用CD8Fab-TACS?分離試劑盒（IBA Lifesciences）對(duì)全血中CD8+細(xì)胞進(jìn)行分離，將分離出的細(xì)胞加入預(yù)先包被好人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot板中（每孔300,000個(gè)細(xì)胞），孵育過(guò)夜。左圖無(wú)Mabtech肽庫(kù)，右圖有Mabtech肽庫(kù)。

使用IFN-γ?ELISpot對(duì)SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S1亞基掃描肽庫(kù)進(jìn)行驗(yàn)證。SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S1亞基掃描肽庫(kù)是對(duì)之前SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S2亞基及核衣殼蛋白（N）肽庫(kù)的補(bǔ)充，其包含166個(gè)來(lái)自人類SARS-CoV-2病毒的多肽，這些多肽由15個(gè)聚體和11個(gè)氨基酸重疊而成，覆蓋刺突蛋白（S）的S1結(jié)構(gòu)域（氨基酸13-685）。肽庫(kù)以凍干粉的形式提供，分為兩瓶，每瓶各含有83個(gè)多肽。合成肽的平均純度為80%。

人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot結(jié)果。取先前經(jīng)PCR證實(shí)為SARS-CoV-2陽(yáng)性患者的外周血單核細(xì)胞（PBMC），加入預(yù)先包被好人干擾素γ（IFN-γ）的ELISpot板中（每孔300,000個(gè)細(xì)胞），孵育過(guò)夜，使用ELISpot對(duì)分泌IFN-γ?的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。左圖無(wú)SARS-CoV-2 S1?掃描肽庫(kù)和CD28抗體，右圖有SARS-CoV-2?刺突蛋白（S）S1亞基掃描肽庫(kù)和CD28抗體。

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◆?人IgG SARS-CoV-2受體結(jié)合區(qū)域（RBD）ELISpot?PLUS?(HRP)試劑盒

人在感染SARS-CoV-2后，機(jī)體內(nèi)的先天性免疫系統(tǒng)會(huì)產(chǎn)生特異性識(shí)別新冠病毒表面蛋白的抗體，如刺突蛋白（S）、核衣殼蛋白（N）、膜蛋白（M）等。新冠病毒與人體的作用位點(diǎn)是其表面刺突蛋白（S）的受體結(jié)合區(qū)域（RBD）與人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）受體，因此特異性識(shí)別SARS-CoV-2?受體結(jié)合區(qū)域（RBD）的抗體可有效阻止病毒與人體結(jié)合。Mabtech的人IgG SARS-CoV-2?受體結(jié)合區(qū)域（RBD）ELISpot?PLUS?（HRP）試劑盒可對(duì)能夠分泌SARS-CoV-2?受體結(jié)合區(qū)域（RBD）特異性IgG抗體的B細(xì)胞及分泌IgG（總IgG）的所有細(xì)胞進(jìn)行定量，檢測(cè)原理如下。

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??試劑盒組分

●?預(yù)包被抗人IgG單克隆抗體

●?帶有免疫缺陷伴血小板減少綜合征（WASP）標(biāo)記的重組受體結(jié)合區(qū)域（RBD）蛋白

●?生物素化檢測(cè)單抗

●?HRP標(biāo)記的抗免疫缺陷伴血小板減少綜合征蛋白（WASP）抗體

●?HRP標(biāo)記的鏈霉親和素

●?多克隆激活劑

●?即用型TMB底物

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??產(chǎn)品特色

●?方便快捷

●?靈敏度高

●?穩(wěn)定性好

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??應(yīng)用實(shí)例

使用ELISpot對(duì)可分泌受體結(jié)合區(qū)域（RBD）特異性抗體IgG的細(xì)胞進(jìn)行定量。在離心管中分別培養(yǎng)來(lái)自COVID-19康復(fù)期及健康人體內(nèi)的外周血單核細(xì)胞（PBMC）3天。徹底清洗細(xì)胞并加入預(yù)包被抗人IgG單克隆抗體的ELISpot孔板（200,000個(gè)細(xì)胞/孔）中，用帶有WASP標(biāo)簽的重組受體結(jié)合區(qū)域（RBD）抗體和HRP標(biāo)記的抗WASP抗體檢測(cè)RBD特異性斑點(diǎn)。左圖有R848+IL-2（用于刺激記憶B細(xì)胞），右圖無(wú)R848+IL-2。

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