駝科，如羊駝和美洲駝，會(huì)產(chǎn)生一類獨(dú)特的僅由重鏈組成的抗體。而抗原結(jié)合片段(Fab)，也稱為僅可變重鏈片段抗體(Variable Heavy-Chain only fragment antibodies，VHH片段)，或納米抗體，是一種新型抗體形式。憑借其15 kDa的小尺寸和出色的特異性和穿透性，VHH為高質(zhì)量和高分辨率成像提供了一個(gè)極好的解決方案。Jackson ImmunoResearch 開(kāi)發(fā)的納米二抗（Nano Secondaries）是一種專門的檢測(cè)試劑，利用VHH片段的獨(dú)特特性來(lái)獲得更好的檢測(cè)結(jié)果。
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圖1.常規(guī)IgG與VHH的比較，駝科動(dòng)物如羊駝只產(chǎn)生重鏈IgG。IgG2和3的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域(Fab片段)不包含重鏈的CH1結(jié)構(gòu)域，并且輕鏈也不存在。
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Jackson ImmunoResearch納米二抗是羊駝產(chǎn)生的多克隆VHH片段抗體(納米抗體)。它們對(duì)人、兔或小鼠具有特異性。小于15kDa的VHH片段抗體比傳統(tǒng)的全I(xiàn)gG抗體小10倍，非常適合需要良好穿透性的成像實(shí)驗(yàn)。納米二抗經(jīng)過(guò)交叉吸附處理，對(duì)目標(biāo)物種具有高度特異性，與其他常用物種的交叉反應(yīng)性極低，使其適用于多種標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。它們可與報(bào)告酶和一系列熒光染料結(jié)合，包括Alexa Fluor，為高分辨率免疫組織化學(xué)和免疫熒光提供了選擇。
納米二抗的優(yōu)勢(shì)：
1、小尺寸可以獲得更高分辨率的圖像
納米抗體的大小是常規(guī)抗體的幾分之一，很容易被用作共聚焦和高分辨率成像的工具，納米抗體直徑小，是用于間接標(biāo)記的常規(guī)抗體復(fù)合物大小的五分之一(24-30nm)，減少了探針和抗原之間的距離，允許捕捉更高分辨率的圖像。
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圖2.用納米二抗染細(xì)胞突出亞細(xì)胞成像的滋養(yǎng)層染色。（Cytokeratin 8 (blue) (DyLight? 405 VHH Fragment Anti-Rabbit (611-474-215)), vinculin (green) (Alexa Fluor? 488 VHH Fragment Anti-Mouse(615-544-214)), and phalloidin (F-actin) (red). Cytokeratin is an intermediate filament and vinculin is a type of focal adhesion. Both images were blocked with 10% Alpaca serum (028-000-001).）
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2、多克隆保證可靠和優(yōu)越的信號(hào)
多克隆對(duì)于表達(dá)量不高的靶標(biāo)也能通過(guò)放大信號(hào)保證高靈敏度。多克隆抗體提供了一種異質(zhì)的抗體群體，每種抗體都有不同的抗原決定簇來(lái)檢測(cè)一抗的不同部分。多克隆納米二抗可以通過(guò)結(jié)合整個(gè)一抗，而不是有限的特定位點(diǎn)/區(qū)域/序列，從而保證多克隆納米二抗可以大量結(jié)合，實(shí)現(xiàn)更高的標(biāo)記效率和更亮的信號(hào)。
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圖3.示意圖顯示了與單克隆納米抗體相比，多克隆納米二抗能夠結(jié)合更多的一抗的綴合物。
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3、卓越的穿透力和清除能力
納米抗體由于其較小的尺寸而表現(xiàn)出優(yōu)異的組織穿透性，并且由于其擴(kuò)散系數(shù)低于常規(guī)抗體，這使其能夠在組織中自由移動(dòng)。缺乏可結(jié)晶片段(Fc)進(jìn)一步提高了該分子從組織中的清除能力，使其成為免疫PET等診斷成像技術(shù)的優(yōu)秀工具。
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圖4.利用納米二抗進(jìn)行formalin固定石蠟包埋(FFPE)小鼠腦中酪氨酸羥化酶的免疫組化染色結(jié)果。
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4、適用于死細(xì)胞或活細(xì)胞樣本染色
具有Fc片段的常規(guī)免疫球蛋白通常僅適用于固定樣品的染色，因?yàn)榛罴?xì)胞的受體會(huì)通過(guò)Fc片段結(jié)合影響生物功能。所以缺少Fc片段的納米抗體可用于活細(xì)胞的免疫染色。
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5、交叉吸附保證獲得更好的特異性和更低的背景
Jackson ImmunoResearch納米二抗VHH抗體會(huì)與常間物種進(jìn)行交叉吸附處理，以降低背景并增強(qiáng)特異性。
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6、適用于多種熒光染料
Jackson ImmunoResearch納米二抗可與從紫外到遠(yuǎn)紅外的廣譜范圍的熒光染料結(jié)合，使研究人員在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，尤其是識(shí)別多種靶蛋白時(shí)，具有最大的靈活性。
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圖5. 利用納米二抗進(jìn)行多重標(biāo)記染色。（Lung tissue stained for E-cadherin (epithelial cells) (green) (AF488 VHH Alpaca Anti-Rabbit (611-544-215)) and Alpha-smooth muscle actin (magenta) (AF647 VHH Alpaca Anti-Mouse 615-604-214).）
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| 615-294-214 | Rhodamine Red?-X (RRX) VHH Fragment Alpaca Anti-Mouse IgG (H+L)??(min X Bov, Hu, Rb Sr Prot) |
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