目前，研究人員們常通過靶點分析對癌癥靶點進行驗證，進而了解和控制其調(diào)控機制，以及在癌癥特征中所起的作用。自噬（Autophagy）是一種應(yīng)激誘導的保護機制，該機制在基礎(chǔ)條件下并不活躍，當受到某些負面條件影響，如營養(yǎng)物質(zhì)耗盡和化學或遭受環(huán)境壓力時，真核細胞通過溶酶體介導的細胞內(nèi)容物的大量降解來利用該機制。

自噬活動的增加在癌癥、神經(jīng)變性疾病、心血管疾病和糖尿病等疾病的病理學研究中的作用，目前已經(jīng)得到廣泛認可和普遍研究。如果機體的溶酶體功能受到抑制，阻止了自噬小泡的去除，那么就可以通過增加的自噬小泡積聚量來體現(xiàn)自噬通量的誘導效果。

Enzo的熱銷產(chǎn)品CYTO-ID? Autophagy Detection Kit 2.0（貨號：ENZ-KIT175），使用了新型染料來檢測自噬小泡和監(jiān)控活細胞的自噬通量，選擇性標記積累的自噬小泡。488 nm可激發(fā)的綠色染料已經(jīng)過了功能優(yōu)化，不染色溶酶體，在自噬前體、自噬體和自噬溶酶體里呈現(xiàn)出明亮的熒光。該試劑盒提供了一種無需細胞轉(zhuǎn)染，可以在活細胞中監(jiān)控細胞自噬的快速定量方法。該試劑盒還包括用于核染色的Hoechst 33342染料、自噬誘導劑（Rapamycin）和溶酶體抑制劑（Chloroquine）。

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作用機制：

CYTO-ID? Autophagy Detection Kit 2.0所用探針是一種陽離子兩親性示蹤劑（CAT）染料，它能以類似誘導磷脂藥物的方式迅速進入到細胞中，并選擇性標記特定的功能分子。

在Enzo升級版的CYTO-ID? Autophagy Detection Kit 2.0試劑盒中，采用了優(yōu)化后的新型探針，不易在溶酶體中發(fā)生積聚的同時，還能夠?qū)εc自噬途徑相關(guān)的小泡進行特異性地標記。

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產(chǎn)品特點：

● 更明亮，更耐光，特異性地染色自噬小泡；

●?操作便捷，無需轉(zhuǎn)染；

●?反應(yīng)迅速，孵育時間只需30分鐘；

●?對自噬性溶酶體的染色效果微乎其微，可以忽略不計，大大降低了背景對染色效果呈現(xiàn)的干擾；

●?能夠快速量化原生異質(zhì)性細胞群中的自噬；

●?有助于高通量篩選自噬激活劑和抑制劑；

●?業(yè)界認可度高，產(chǎn)品的文獻引用率高。

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產(chǎn)品實例：

Figure 1.?基于流式細胞儀的Jurkat細胞的自噬分析圖。Jurkat細胞不進行處理或分別用0.5μM雷帕霉素（RAP）、10μM氯喹（CLQ）或兩者同時處理20小時。用CYTO-ID? Green Detection Reagent 2染色30分鐘后，清洗細胞，用流式細胞儀進行分析。結(jié)果以直方圖疊加的形式呈現(xiàn)，用RAP+CLQ共同處理的細胞熒光明顯增強。

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Figure 2.?HeLa細胞在(A)完全培養(yǎng)基或(B)含有40?μM氯喹的饑餓培養(yǎng)基（EBSS）中培養(yǎng)4小時后，用CYTO-ID? Green Detection Reagent 2進行染色。在含有氯喹的EBSS中的饑餓細胞顯示出非常明亮的綠色熒光信號和斑點狀結(jié)構(gòu)。

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Figure 3.?HepG2細胞自噬的微孔板分析。HepG2細胞在DMSO?(control)、0.5 μM雷帕霉素(Rap)、10?μM氯喹(CLQ)或0.5 μM?Rap+10?μM CLQ中培養(yǎng)20小時后，用CYTO-ID? Green Detection Reagent 2進行染色。細胞用Hoechst 33342染色后進行細胞數(shù)歸一化，通過CYTO-ID? Green Detection Reagent 2檢測出Rap+CLQ處理組的細胞自噬增加。

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產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品最新引用文獻：

1.?Amorfrutin B Protects Mouse Brain Neurons from Hypoxia/Ischemia by Inhibiting Apoptosis and Autophagy Processes Through Gene Methylation- and miRNA-Dependent Regulation: K. Przepiórska, et al.; Mol. Neurobiol.?60, 576 (2023),?Abstract;

2.?Brain injury accelerates the onset of a reversible agerelated microglial phenotype associated with inflammatory neurodegeneration: R.M. Ritzel, et al.; Sci. Adv.?9, eadd1101 (2023),?Abstract;

3.?CNS serotonin content mediating food deprivation-enhanced learning is regulated by hemolymph tryptophan concentration and autophagic flux in the pond snail: Y. Totani, et al.; Nutr. Neurosci.?26, 217 (2023),?Abstract;

4.?Effects of Sirolimus treatment on patients with β-Thalassemia: Lymphocyte immunophenotype and biological activity of memory CD4+ and CD8+ T cells: M. Zurlo, et al.; J. Cell. Mol. Med.?27, 353 (2023),?Abstract;

5.?Impaired Autophagy in Krabbe Disease: The Role of BCL2 and Beclin-1 Phosphorylation: N. Papini, et al.; Int. J. Mol. Sci.?23, 5984 (2023),?Abstract;

6.?Nanoparticles of folic acid-methyl-b-cyclodextrin (FA-MbCD)/adamantane-albumin exhibit enhanced antitumor activity compared with FA-MbCD alone: A. Sakai, et al.; FEBS Open Bio?13, 233 (2023),?Abstract;

7.?Novel hydroxamic acid derivative induces apoptosis and constrains autophagy in leukemic cells: M.A. Fischer, et al.; J. Adv. Res. (2023),?Abstract;

8.?Production and Characterization of K562 Cellular Clones Hyper-Expressing the Gene Encoding α-Globin: Preliminary Analysis of Biomarkers Associated with Autophagy: M. Zurlo, et al.; Genes?14, 556 (2023),?Abstract;

9.?Short peptide domains of the Wnt inhibitor sFRP4 target ovarian cancer stem cells by neutralizing the Wnt β-catenin pathway, disrupting the interaction between β-catenin and CD24 and suppressing autophagy: S.M. Sundaram, et al.; Life Sci.?16, 121384 (2023),?Abstract;

10.?Surface-Modified Inhaled Microparticle-Encapsulated Celastrol for Enhanced Efficacy in Malignant Pleural Mesothelioma: X. Wang, et al.; Int. J. Mol. Sci.?24, 5204 (2023),?Abstract;

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