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Mirus新上市RevIT? AAV Enhancer, 提高AAV產(chǎn)量的又一利器!

2023-08-29
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腺相關(guān)病毒?(AAV) 是基因治療中使用最廣泛的傳遞機(jī)制。近年來(lái),基于AAV病毒所開發(fā)的基因療法的研發(fā)及臨床試驗(yàn)注冊(cè)數(shù)量也呈指數(shù)級(jí)增長(zhǎng)。截止本文撰寫之時(shí),美國(guó)食品和藥物管理局已批準(zhǔn)五項(xiàng)AAV療法,也是全球市場(chǎng)上最為昂貴的藥物,其中售價(jià)最高的Hemgenix?,每劑約為350萬(wàn)美元。由于該療法每劑量可能需要1011-1016病毒載量,如何實(shí)現(xiàn)高效的AAV生產(chǎn),已成為工藝流程優(yōu)化中的重要一環(huán)。


Mirus成立于1996年,在核酸遞送領(lǐng)域深耕多年,TransIT-VirusGEN??GMP 轉(zhuǎn)染試劑支持?AAV及慢病毒(LV)從科研到GMP商業(yè)級(jí)別生產(chǎn)。不同于傳統(tǒng)基于單組分的轉(zhuǎn)染試劑(如陽(yáng)離子聚合物聚乙烯亞胺,PEI),Mirus將專利的多聚物及脂質(zhì)技術(shù)進(jìn)行多重組合,針對(duì)不同細(xì)胞類型,不同應(yīng)用場(chǎng)景,有著不同轉(zhuǎn)染方案。

Mirus新上市RevIT? AAV Enhancer, 提高AAV產(chǎn)量的又一利器!


在病毒生產(chǎn)工藝方面,除了需要克服細(xì)胞遞轉(zhuǎn)過程中的多重阻礙,以實(shí)現(xiàn)更高效轉(zhuǎn)染和更低細(xì)胞毒性;增強(qiáng)子的加入,可大幅度提升多種血清型AAV病毒生產(chǎn)載量。但Mirus并沒有止步于此,為了進(jìn)一步提高下游生產(chǎn)中的AAV病毒基因組產(chǎn)量, 今年七月底Mirus發(fā)布用于AAV生產(chǎn)的RevIT? AAV Enhancer,可搭配Mirus?TransIT-VirusGEN??GMP 轉(zhuǎn)染試劑或其他品牌轉(zhuǎn)染試劑?(PEI)?;贖EK293懸浮細(xì)胞數(shù)據(jù),相對(duì)于老版本AAV生產(chǎn),RevIT? AAV Enhancer可提高AAV基因組滴度1.2-4.9倍,并且便于使用,很容易整合入現(xiàn)有AAV生產(chǎn)工藝工作流程中。Mirus RevIT? AAV Enhancer的推出,使得AAV上產(chǎn)上游成本進(jìn)一步降低成為可能,降低了基因治療單劑量成本。


Mirus新上市RevIT? AAV Enhancer, 提高AAV產(chǎn)量的又一利器!

● RevIT? AAV Enhancer:可1.2-4.9X提升AAV病毒基因組滴度

平行對(duì)比Mirus TransIT-VirusGEN?搭配老版本AAV增強(qiáng)子(VirusGen + Enh 1.0)以及新版本RevIT? AAV Enhancer (VirusGen + RevIT),針對(duì)不同血清型 AAV2、AAV8、AAV9,AAV基因組滴度分別有著1.6、4.9以及1.2倍提升。除此之外,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在測(cè)試的所有血清型中,使用RevIT? AAV Enhancer也在不同程度上得到更高比例的實(shí)心率?(圖1)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在搭配Mirus TransIT-VirusGEN?轉(zhuǎn)染試劑時(shí),可顯著提高病毒基因組滴度(GC/mL)及實(shí)心率(%Full Capsids)。

?圖1. 在加入RevIT? AAV Enhancer后,相比Mirus老版本增強(qiáng)子,可1.2-4.9X提升AAV基因組拷貝數(shù),改善AAV病毒實(shí)心率。


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●?RevIT? AAV Enhancer:具有廣泛適配性,可搭配其他品牌轉(zhuǎn)染試劑(PEI),AAV病毒基因組滴度有著顯著提升

平行測(cè)試兩個(gè)品牌轉(zhuǎn)染試劑:Polyplus FectoVIR??病毒轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer F”)以及Polyplus PEIpro?病毒轉(zhuǎn)染試劑(“Polymer P”),在加入Mirus RevIT? AAV Enhancer,針對(duì)不同血清型AAV2、AAV8、AAV9,AAV基因組滴度分別有著1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(圖2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在搭配其他品牌病毒轉(zhuǎn)染試劑時(shí),Mirus RevIT? AAV Enhancer可顯著提高AAV病毒基因組滴度(GC/mL)。

?圖2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒轉(zhuǎn)染試劑,在搭配Mirus RevIT? AAV Enhancer,針對(duì)不同血清型,其AAV病毒基因組滴度都有著顯著提升。

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●?RevIT? AAV Enhancer:具有廣泛的適配性,可適用于不同培養(yǎng)基體系

TransIT-VirusGEN?轉(zhuǎn)染試劑搭配RevIT? AAV Enhancer,在不同類型病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基中,具有很好的兼容性。測(cè)試使用293-VP 2.0細(xì)胞,搭配培養(yǎng)基類型包括VPM (Thermo Fisher) 及 BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,針對(duì)不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9,RevIT? AAV Enhancer在不同培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)條件下,AAV病毒基因組滴度提升方面并無(wú)顯著差異。

?圖3. 更換不同品牌病毒生產(chǎn)培養(yǎng)基,AAV病毒基因組滴度的增加無(wú)顯著差異。

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?RevIT? AAV Enhancer:實(shí)驗(yàn)流程靈活性,不同加入時(shí)間窗口有著近似表現(xiàn)

為了進(jìn)一步確定加入RevIT? AAV Enhancer可有效提高AAV病毒基因組載量,是否需要嚴(yán)格把控加入時(shí)間窗口。平行測(cè)試不同加入時(shí)間點(diǎn),包括轉(zhuǎn)染前30或60分鐘、轉(zhuǎn)染時(shí)及轉(zhuǎn)染后。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相對(duì)于對(duì)照,在加入RevIT? AAV Enhancer不同測(cè)試時(shí)間點(diǎn), AAV8病毒基因組滴度都有穩(wěn)步的提升(2倍),并且病毒實(shí)心率穩(wěn)定保持在相同水平。該組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,RevIT? AAV Enhancer加入時(shí)間點(diǎn)的靈活性,一定程度上簡(jiǎn)化了生產(chǎn)工作流。

?圖4. ?RevIT? AAV Enhancer加入時(shí)間點(diǎn)的靈活性

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?實(shí)驗(yàn)tips:如何進(jìn)行病毒轉(zhuǎn)染試劑評(píng)估?什么是病毒載量?如何檢測(cè)?

更多詳細(xì)信息,請(qǐng)查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card?


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? 相關(guān)產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱規(guī)格貨號(hào)鏈接
RevIT? AAV Enhancer1.5 mlMIR 8000link
10 x 1.5 mlMIR 8006
VirusGEN??AAV轉(zhuǎn)染試劑及RevIT??AAV?EnhancerFor 1L of?CultureMIR 8007
For 10L of?CultureMIR 8008
TransIT-VirusGEN?轉(zhuǎn)染試劑0.3 mlMIR 6703link
0.75 mlMIR 6704
1.5 mlMIR 6700
5 x 1.5 mlMIR 6705
10 x 1.5 mlMIR 6706
30 mlMIR 6720
TransIT-VirusGEN??GMP級(jí)別轉(zhuǎn)染試劑150 mlMIR 6845-GMPlink
VirusGEN??AAV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)1 kit for 1 L of?cell cultureMIR 6750link
VirusGEN??GMP級(jí)別AAV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)1 Kit - for 50 L of?cell cultureMIR 6815-GMPlink
VirusGEN??LV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)1 kit for 1 L of?cell cultureMIR 6760link
VirusGEN??GMP級(jí)別LV轉(zhuǎn)染試劑(套裝)1 Kit - for 50 L of?cell cultureMIR 6825-GMPlink


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??Mirus產(chǎn)品年鑒?

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TransIT-X2轉(zhuǎn)染試劑

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