產(chǎn)品名稱：Human IL-6 ELISA kit
中文名：人IL-6 ELISA試劑盒
貨號：EHC007
檢測原理:
欣博盛 QuantiCyto? ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法：抗人IL-6單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的人IL-6會與單抗結(jié)合，游離的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-6抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，生物素與親和素特異性結(jié)合；抗人IL-6抗體與結(jié)合在單抗上的人IL-6結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物，若反應(yīng)孔中有人IL-6，辣根過氧化物酶會使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色，加終止液變黃。在450 nm處測OD值，人IL-6濃度與OD450值之間呈正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中人IL-6的濃度。
試劑盒組成：
儲存條件：
試驗所需自備試驗器材 (不提供，但可協(xié)助購買) :
1. 酶標(biāo)儀(450 nm波長濾光片)
2. 進(jìn)口品牌高精度加液器及一次性吸頭：0.5-10 ul, 2-20 ul, 20-200ul, 200-1000 ul。
3. 37 ℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水，坐標(biāo)紙等。
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標(biāo)本收集:
1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。
2. 血漿抗凝劑推薦使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。
3. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
4. 標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20 ℃，-70 ℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測。
5. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù))。
?注意事項:
1. 試劑盒使用前請保存在2-8 ℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品若未用完，請廢棄。
2. 濃縮生物素化抗體，濃縮酶結(jié)合物體積小，運(yùn)輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。
3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?，F(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50 ℃）使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
4. 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。請?zhí)崆白稍冃啦┦⑸锟萍加邢薰尽?/p>
5. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。
6. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。
7. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試驗結(jié)果。
8. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo)本時，請按國家生物試驗室安全防護(hù)條列執(zhí)行。
9. 如果分次使用，請根據(jù)需要量配制各組分，以免配制過多造成浪費(fèi)而影響后續(xù)試驗。剩余板孔請用封板膠紙封住，放回鋁箔袋中,2個月內(nèi)用完。
檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。
2. 用雙蒸水將20×濃縮洗滌液稀釋成1×工作液。未用完的放回4 ℃。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 開蓋前1000rpm離心1min。加入標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液1.0 ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻(濃度為200 pg/ml)。然后根據(jù)需要進(jìn)行稀釋。(建議標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0 pg/ml)。0 pg/ml即空白孔。復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品原液(200 pg/ml）若未用完的請廢棄。
4. 生物素化抗體工作液：按當(dāng)次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，用生物素化抗體稀釋液將30×濃縮生物素化抗體稀釋成1×工作液。當(dāng)日使用。若實驗次數(shù)過多導(dǎo)致生物素化抗體量不足，可向欣博盛公司單獨購買生物素化抗體。（須提供抗體批號）
5. 酶結(jié)合物工作液：按當(dāng)次試驗所需要的用量，使用前20分鐘，用酶結(jié)合物稀釋液將30×濃縮酶結(jié)合物稀釋成1×工作液。當(dāng)日使用。
若實驗次數(shù)過多導(dǎo)致濃縮酶結(jié)合物量不足，可向欣博盛公司單獨購買濃縮酶結(jié)合物。（須提供酶結(jié)合物批號）
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例：
以500 ul/管為例，用標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液將復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品母液進(jìn)行倍比稀釋，具體稀釋方法如下圖，也可根據(jù)實際用量來稀釋，如200 ul/管。
洗滌方法:
1. 自動洗板機(jī)：要求注入的洗滌液為350 ul，注入與吸出間隔30－60秒。洗板5次。
2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350 ul，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。
操作步驟:
1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓實自封條，密封口袋，放回4 ℃。
2．空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本通用稀釋液，其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100 ul/孔)，用封板膠紙封住反應(yīng)孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育90分鐘。
3．提前20分鐘準(zhǔn)備生物素化抗體工作液。
4．洗板5次。
5．空白孔加生物素化抗體稀釋液，其余孔加入生物素化抗體工作液(100 ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育60分鐘。
6．提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ℃)放置。
7．洗板5次。
8．空白孔加酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100 ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育30分鐘。
9．打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。
10．洗板5次。
11．加入顯色底物(TMB)100 ul/孔，37 ℃恒溫箱，避光孵育15分鐘。
12．加入反應(yīng)終止液100 ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi))。在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。
13. 實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。
建議保存酶標(biāo)板框，以備下次或者今后試驗使用。
結(jié)果判斷:
1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，手工繪制或用軟件繪制
并選取最佳擬合曲線，推薦使用二次多項式方程擬合。通過標(biāo)本
的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。
3. 若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。
注意：本圖僅供參考，應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線計算標(biāo)本中人IL-6的含量。
靈敏度、特異性和重復(fù)性:
● 靈敏度：最小可測人IL-6達(dá)1.56 pg/ml(8次獨立重復(fù)實驗平均值)。
● 特異性：本試劑盒特異性識別天然和重組人IL-6。與以下細(xì)胞因子等無明顯交叉反應(yīng)。
● 重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%。
人 IL-6 簡介：
白細(xì)胞介素 6(interleukin 6,IL-6)是一種多功能細(xì)胞因子，由多種細(xì)胞產(chǎn)生，對免疫應(yīng)答、急性期反應(yīng)、造血和神經(jīng)系統(tǒng)有多方面作用。成熟人 IL-6 由 184 個氨基酸組成，與小鼠和大鼠 IL-6 有 39%的氨基酸序列一致性。IL-6 的生物學(xué)活性主要包括 6 個方面：調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)造血系統(tǒng)、誘導(dǎo)急性期蛋白、調(diào)節(jié)腫瘤生長、調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)和其它。調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答：誘導(dǎo) B 細(xì)胞分化和產(chǎn)生抗體，誘導(dǎo) T 細(xì)胞表達(dá) IL-2 受體和產(chǎn)生 IL-2，誘導(dǎo) T 細(xì)胞活化增殖和分化、激素，保護(hù)神經(jīng)原抵抗毒 CTL 分化。調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)：誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化、支持細(xì)胞存活，誘導(dǎo)神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生性物質(zhì)，促進(jìn)神經(jīng)重建，誘導(dǎo)急性期蛋白，誘導(dǎo)多種急性期蛋白合成和分泌。調(diào)節(jié)造血系統(tǒng)：誘導(dǎo)造血干細(xì)胞生長，誘導(dǎo)巨核細(xì)胞成熟。調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生長，促進(jìn)或抑制腫瘤細(xì)胞生長。其它作用包括促進(jìn)中性粒細(xì)胞分化、活化或骨細(xì)胞，促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞、腎小球細(xì)胞生長，誘導(dǎo) ACTH 合成等。IL-6與臨床中許多疾病有著廣泛的聯(lián)系，如呼吸系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、泌尿系統(tǒng)疾病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病和腫瘤等，IL-6 的阻斷將成為針對這些疾病的新型治療策略，例如抗 IL-6R 單抗藥物。
部分文獻(xiàn)引用：
Lin J, Jiang Y, Luo Y, et al. (2020). Multi-walled carbon nanotubes (MWCNTs) transformed THP-1 macrophages into foam cells: impact of pulmonary surfactant component dipalmitoylphosphatidylcholine. Journal of Hazardous Materials.?
Lin Y, J. Z., Jin H, et al. (2020). Long non-coding RNA DLGAP1-AS1 facilitates tumorigenesis and epithelial–mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via the feedback loop of miR-26a/b-5p/IL-6/JAK2/STAT3 and Wnt/β-catenin pathway. Cell Death & Disease.?
Jiang Y, Gong H, Jiang S, et al. (2020). Multi-walled carbon nanotubes decrease neuronal NO synthase in 3D brain organoids. Science of The Total Environment.?
Li J, Huang S, Zeng L, et al. (2020). Necroptosis in head and neck squamous cell carcinoma: characterization of clinicopathological relevance and in vitro cell model. Cell Death & Disease.?
Wei S, Liu W, Qi Y, et al. (2020). Disordered serum erythroferrone and hepcidin levels as indicators of the spontaneous abortion occurrence during early pregnancy in humans. British Journal of Haematology.?
Li H, Guan Y, Sun B, et al. (2020). Role of bone marrow-derived mesenchymal stem cell defects in CD8+ CD28-suppressor T-lymphocyte induction in patients with immune thrombocytopenia and associated mechanisms. British Journal of Haematology.?
Ye H, Zhou Y, Ma P, et al. (2020). Analysis of the anti-inflammatory effect of the aptamer LA27 and its binding mechanism. International Journal of Biological Macromolecules.?
Li J, H. Y., Mao W, et al. (2019). LincK contributes to breast tumorigenesis by promoting proliferation and epithelial-to-mesenchymal transition. Journal of hematology & oncology.?
Li B, H. J., Hong M, et al. (2019). piRNA-823 delivered by multiple myeloma-derived extracellular vesicles promoted tumorigenesis through re-educating endothelial cells in the tumor environment.?
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