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六種ELISA小鼠樣品處理方法總結(jié)

2022-03-05
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本文將介紹小鼠心臟組織、小鼠肝組織、小鼠脾臟腫瘤等六種ELISA小鼠樣品處理方法,如需購(gòu)買(mǎi)相關(guān)產(chǎn)品或想要相關(guān)文獻(xiàn),請(qǐng)聯(lián)系我們欣博盛生物。


1.小鼠心臟組織處理方法


● 提取緩沖液:100 mM PIPES (pH?7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制劑混合物(Sigma-Aldrich)


● 步驟:取左心室組織,在異戊烷中冷凍。將~10?mg左心室組織于2–3 ml提取緩沖液中勻漿,然后在4℃下16000g離心30分鐘。上清用于 ELISA法測(cè)定BDNF蛋白水平。單位pg /mg總蛋白。


● 參考文獻(xiàn):Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). 'Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion.' EBioMedicine 47: 384-401.


2.小鼠肝組織處理方法


● 提取緩沖液:RIPA緩沖液(50 mM Tris–HCl,150 mM氯化鈉,1 mM EDTA,1%NP-40,1%脫氧膽酸鈉,0.1%十二烷基硫酸鈉),加蛋白酶抑制劑混合物(100×;Cell Signaling Technology,USA)


● 步驟:肝組織(50 mg)在提取緩沖液中勻漿。離心取上清,采用ELISA法檢測(cè)了IL‐25, IL‐33, IL‐1β, MMP2, MMP9, 及TIMP1的含量。


● 參考文獻(xiàn):Loh, Z., R. L. Fitzsimmons, R. C. Reid, D. Ramnath, A. Clouston, P. K. Gupta, K. M. Irvine, E. E. Powell, K. Schroder, J. L. Stow, M. J. Sweet, D. P. Fairlie and A. Iyer (2019). 'Inhibitors of class I histone deacetylases attenuate thioacetamide-induced liver fibrosis in mice by suppressing hepatic type 2 inflammation.' Br J Pharmacol 176(19): 3775-3790.


3.小鼠脾臟腫瘤的制備方法


● 提取緩沖液:50 mM磷酸鉀,pH 7.1,0.1 M NaCl,2 mM EDTA,0.4 mM phenylmethylsulfonyl fluoride,60 μg/mL soybean trypsin inhibitor,2 μg/mL leupeptin,2 μg/mL aprotinin,2 μg/mL pepstatine


● 步驟:切除脾臟腫瘤組織,立即在液氮中冷凍并在-70 °C下儲(chǔ)存。冷凍組織在冰浴預(yù)冷提取緩沖液中化凍。冰浴,撕裂組織。然后4℃下,超聲處理。4℃下以100000 × g離心15分鐘去除碎片,所得上清再次在4℃下以100000 × g離心30分鐘。上清液含有胞漿蛋白,顆粒包含膜部分。


● 參考文獻(xiàn):Yao, M., S, Kargman, E.C. Lam, C.R. Kelly, Y.X. Zheng, P. Luk, E. Kwong, J.F. Evans and M.M. Wolfe (2003) Inhibition of cyclooxygenase-2 by rofecoxib attenuates the growth and metastatic potential of colorectal carcinoma in mice. Cancer Research 63(3):586-592.


4.小鼠肺組織處理方法


● 提取緩沖液:1×磷酸鹽緩沖液(PBS)


● 步驟:左肺在1×磷酸鹽緩沖鹽水中機(jī)械破壞,經(jīng)過(guò)4次冷凍/解凍循環(huán)以打破細(xì)胞膜,然后4℃下,5000g,離心5分鐘,回收上清用于ELISA法測(cè)定Ang II 濃度。


● 參考文獻(xiàn):Gonzalez-Tajuelo, R., M. de la Fuente-Fernandez, D. Morales-Cano, A. Munoz-Callejas, E. Gonzalez-Sanchez, J. Silvan, J. M. Serrador, S. Cadenas, B. Barreira, M. Espartero-Santos, C. Gamallo, E. F. Vicente-Rabaneda, S. Castaneda, F. Perez-Vizcaino, A. Cogolludo, L. J. Jimenez-Borreguero and A. Urzainqui (2020). 'Spontaneous Pulmonary Hypertension Associated With Systemic Sclerosis in P-Selectin Glycoprotein Ligand 1-Deficient Mice.' Arthritis Rheumatol 72(3): 477-487.


5.小鼠腎臟組織處理方法


● 提取緩沖液:0.1 M Tris-HCl (pH 7.4)


● 步驟:將0.5 g腎組織與5 ml 提取緩沖液混合。用機(jī)械攪拌器攪拌均質(zhì)。勻漿離心15分鐘(5000g)兩次。取上清用ELISA法測(cè)TNF-α和IL-1β濃度。


● 參考文獻(xiàn): Jaremek, M., Nieradko-Iwanicka, B (2020). ' The effect of subacute poisoning with fenpropathrin on mice kidney function and the level of interleukin 1 beta and tumor necrosis factor alpha' MOLECULAR BIOLOGY REPORTS 47(6):4861-4865.


6.小鼠腦組織處理方法


方法一:

● 提取緩沖液:0.9%生理鹽水


● 步驟:麻醉小鼠,取腦組織。按每200 mg加1 ml的量加0.9%生理鹽水,機(jī)械研磨,勻漿在4℃下以12000 rpm離心10 min。取上清用于ELISA法檢測(cè)IL-1β, IL-6, 及TNF-α的含量。


● 參考文獻(xiàn):Lai, N., D. Wu, T. Liang, P. Pan, G. Yuan, X. Li, H. Li, H. Shen, Z. Wang and G. Chen (2020). 'Systemic exosomal miR-193b-3p delivery attenuates neuroinflammation in early brain injury after subarachnoid hemorrhage in mice.' J Neuroinflammation 17(1): 74.


方法二:

● 提取緩沖液:100 mM PIPES (pH?7)、500mM NaCl、0.2%Triton X-100、2mM EDTA、200μM PMSF和蛋白酶抑制劑混合物(Sigma-Aldrich)


● 步驟:取海馬組織,在異戊烷中冷凍。將整個(gè)海馬體于2–3ml提取溶解緩沖液中勻漿,然后在4℃下16000g離心30分鐘。上清用于 ELISA法測(cè)定BDNF蛋白水平。單位pg /mg總蛋白。


● 參考文獻(xiàn):Agrimi, J., C. Spalletti, C. Baroni, G. Keceli, G. Zhu, A. Caragnano, M. Matteucci, S. Chelko, G. A. Ramirez-Correa, D. Bedja, V. Casieri, N. Di Lascio, A. Scalco, A. P. Beltrami, N. Paolocci, M. Caleo and V. Lionetti (2019). 'Obese mice exposed to psychosocial stress display cardiac and hippocampal dysfunction associated with local brain-derived neurotrophic factor depletion.' EBioMedicine 47: 384-401.


方法三:

● 提取緩沖液:PBS含有蛋白酶抑制劑混合物


● 步驟:處死動(dòng)物并取頭部。解剖獲取腦區(qū)(海馬體和皮質(zhì))。并用2-甲基丁烷在干冰上快速冷凍。將大腦樣本置于含有蛋白酶抑制劑混合物的無(wú)菌PBS中,均質(zhì)。4°C,11000 rpm,離心20分鐘。取上清備用。


● 參考文獻(xiàn):Lee, J., S.L. Chan, and M P. Mattson (2002) Adverse effect of a presenilin-1 mutation in microglia results in enhanced nitric oxide and inflammatory cytokine responses to immune challenge in the brain. Neuromolecular Medicine 2(1):29-45.


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