畅享海角平台破解平台-海角社区官网官方入口

您好,歡迎光臨欣博盛生物科技商城!
服務(wù)熱線:400 680 0892
新聞資訊 News

RIG-I 信號通路

2023-06-13
瀏覽次數(shù): 394

RIG-I 配體

? 5’ppp-dsRNA

5’ppp-dsRNA 是一種5’三磷酸雙鏈RNA,通過一個由19個核酸分子通過磷酸二酯鍵聚合成的5`三磷酸單鏈RNA和其非三磷酸互補鏈雜交形成。5’ppp-dsRNA的序列可以通過篩選各種序列突變體確定。未加帽的5’三磷酸雙鏈RNA能夠被RIG-I特異性識別。

? 3p-hpRNA

3p-hpRNA是通過體外轉(zhuǎn)錄甲型流感病毒(H1N1)序列而產(chǎn)生的5’三磷酸發(fā)夾RNA。這個有87個核酸分子的RNA寡核苷酸含有未加帽的5`三磷酸酯末端和雙鏈片段,它們是RIG-I識別的特征結(jié)構(gòu)。3p-hpRNA是RIG-I的一種有效并特異性的激動劑。


RIG-I/MAVS 報告基因細胞

InvivoGen提供一系基于人源肺癌細胞株A549,小鼠巨噬細胞RAW和人源胚腎細胞HEK293穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系,助力RNA感受器RIG-I信號通路的研究。這些細胞系包括RIG-I或MAVS基因的敲除細胞株(衍生自A549或RAW細胞系)或者RIG-I基因的過表達細胞株(衍生自HEK-293細胞系)。

? A549-Dual?

? A549-Dual? KO-RIG-I

? A549-Dual? KO-MAVS? ??

? RAW-Lucia? ISG

? RAW-Lucia? ISG KO-RIG-I

? RAW-Lucia? ISG KO-MAVS

? HEK-Lucia? Null

? HEK-Lucia? RIG-I



描述


所有的RIG-I/MAVS報告基因細胞系均表達一個含有分泌型熒光素酶基因ISG(干擾素刺激基因)誘導型構(gòu)件。活化RIG-I/MAVS信號通路可誘導ISG啟動子的活化并產(chǎn)生熒光素酶,該酶存在于細胞上清并能夠通過熒光素酶檢測試劑QUANTI-Luc?檢測定量。源于A549的細胞攜帶一個額外的NF-κB誘導表達分泌型堿性磷酸酶(SEAP)基因構(gòu)件,該酶的活性能夠通過SEAP檢測試劑QUANTI-Blue?檢測定量。

這些RIG-I/MAVS報告基因細胞株攜帶Zeocin?單抗性基因或Zeocin?和Blasticidin(參見最后一頁)雙抗性基因。


結(jié)果


使 用 RIG-I激動劑,復合了 LyoVec?的 5’ppp-dsRNA和3p-hpRNA刺激A549-Dual?和RAW-Lucia? ISG細胞系,ISG應(yīng)答顯著。在A549-Dual?細胞中3p-hpRNA激動性強度明顯高于5’pppdsRNA,30 ng/ml的3p-hpRNA復合物活化信號已明顯高于300 ng/ml 5’ppp-dsRNA的復合物。相反,在RIG-I-KO或MAVS-KO細胞株中應(yīng)答消失。使用RIG-I配體刺激HEK-Lucia?對照細胞時ISG反應(yīng)很弱。而在HEK-Lucia? RIG-I細胞中,由于RIG-I基因的組成型過表達導致這種應(yīng)答尤為強烈。同樣,當使用3p-hpRNA和5’ppp-dsRNA時觀察到更高水平的ISG應(yīng)答。在衍生自A549的細胞株中NF-κB對于RIG-I配體的反應(yīng)跟ISG應(yīng)答是相似的,雖然前者更弱一些(參考網(wǎng)站數(shù)據(jù))。

RIG-I 信號通路


ISG對RIG-I配體的反應(yīng):使用300 ng/ml的5’ppp-dsRNA或30 ng/ml的3p-hpRNA刺激衍生自A549的細胞;使用1 μg/ml 5’ppp-dsRNA或3p-hpRNA刺激衍生自RAW和HEK293的細胞。經(jīng)過孵育過夜,可使用QUANTI-Luc?檢測上清中Lucia熒光素酶活性的相對光單位(RLUs)以測試ISG的反應(yīng)。


Product
QuantityCat.code
A549-Dual? cells3-7 x 10^6 cellsa549d-nfis
A549-Dual? KO-MAVS cells3-7 x 10^6?cellsa549d-komavs
A549-Dual? KO-RIG-I cells3-7 x 10^6?cellsa549d-korigi
RAW-Lucia?ISG cells3-7 x 10^6?cellsrawl-isg
RAW-Lucia?ISG-KO-MAVS cells3-7 x 10^6?cellsrawl-komavs
RAW-Lucia?ISG-KO-RIG-I cells3-7 x 10^6?cellsrawl-korigi
HEK-Lucia? Null cells3-7 x 10^6?cellshkl-null
HEK-Lucia? RIG-I cells3-7 x 10^6?cellshkl-hrigi
5’ppp-dsRNA25 μgtlrl-3prna
3p-hpRNA25 μgtlrl-hprna


相關(guān)產(chǎn)品


PRODUCTDESCRIPTIONCAT. CODE
QUANTI-Luc?Luciferase detection reagentrep-qlc1
QUANTI-Blue?SEAP detection reagentrep-qb1



詳情請聯(lián)系 Invivogen 全國授權(quán)代理-欣博盛生物科技?


全國服務(wù)熱線: 4006-800-892? ? ? ?郵箱: market@neobioscience.com?

深圳: 0755-26755892? ? ? ? ?北京: 010-88594029? ? ? ? ? ??

廣州:020-87615159? ? ? ? ?上海: 021-34613729

代理品牌網(wǎng)站: m.yuebanme.com?

自主品牌網(wǎng)站: www.neobioscience.net

分享到:
關(guān)注欣博盛公眾號
Copyright ?2021 - 2023 深圳欣博盛生物科技有限公司
  網(wǎng)站地圖
犀牛云提供企業(yè)云服務(wù)