?抗污染抗生素

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如何避免細(xì)胞污染？

1?進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)確保處于無(wú)菌環(huán)境，并使用恰當(dāng)?shù)臏缇夹g(shù)。

2?細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中所使用的培養(yǎng)基或添加的培養(yǎng)物均要確保無(wú)菌無(wú)污染。

3?定期使用顯微鏡或檢測(cè)試劑盒監(jiān)測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基，以確保無(wú)微生物污染。

4?使用抗污染抗生素。在原代細(xì)胞培養(yǎng)或克隆過(guò)程中微生物污染是難以發(fā)現(xiàn)的，Invivogen公司為此設(shè)計(jì)了具有預(yù)防功能的防污染試劑。Invivogen公司可提供的抗污染抗生素有Plasmocin? prophylactic，Normocin?，?Primocin??及Fungin?。

如何鑒別細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被哪種微生物污染？

如果細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中存在細(xì)菌和/或真菌污染，可以使用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行鑒別。因?yàn)樗鼈兊纳L(zhǎng)速度很快，可以使細(xì)胞培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或菌斑，一般48小時(shí)后即可用肉眼檢測(cè)。隨后可使用檢測(cè)試劑盒對(duì)這些微生物種類進(jìn)行鑒定。然而，支原體污染不能直接用肉眼觀察，也不能通過(guò)光學(xué)顯微鏡進(jìn)行鑒別，只能通過(guò)特有的分析方法（如支原體檢測(cè)試劑盒）進(jìn)行檢測(cè)。因此，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中支原體污染很容易被忽視。Invivogen提供的PlasmoTest?支原體污染檢測(cè)試劑盒結(jié)果可靠，分析準(zhǔn)確，尤其是可以排除假陽(yáng)性或不確定的結(jié)果。

針對(duì)不同微生物的污染，應(yīng)如何選擇Invivogen的抗污染抗生素？

在凍存細(xì)胞之前的細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，可以添加抗污染抗生素嗎？

可以的，在凍存細(xì)胞之前可以添加Plasmocin??prophylactic（預(yù)防支原體污染試劑）或廣譜抗生素Normocin?。但是，在這之前需使用光學(xué)顯微鏡鑒定細(xì)胞是否被細(xì)菌或真菌污染，或使用PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)是否存在支原體污染。

Invivogen是否可以提供一種可以同時(shí)抵抗細(xì)菌、真菌、支原體污染的抗生素嗎？

Normocin?和Primocin?這兩款抗生素是廣譜性的，可同時(shí)抵御細(xì)菌、真菌、支原體的污染。兩者的區(qū)別是Primocin?推薦用于原代細(xì)胞培養(yǎng)中預(yù)防微生物的污染，而Normocin?則推薦用于細(xì)胞系培養(yǎng)。

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可以同時(shí)使用Invivogen的抗污染抗生素及基因篩選抗生素嗎？抗污染抗生素會(huì)影響基因篩選抗生素的作用效果嗎？

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中可同時(shí)使用Invivogen的抗污染抗生素及基因篩選抗生素，抗污染抗生素的使用不會(huì)干擾常用的基因篩選抗生素的作用效果，例如G418, Blasticidin, Puromycin, Hygromycin B和?Zeocin?。

?細(xì)菌污染

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)如何鑒別細(xì)菌污染？

由于細(xì)菌比真核細(xì)胞小很多，因此在細(xì)菌污染的早期階段通常被認(rèn)為是細(xì)胞碎片。這個(gè)時(shí)候應(yīng)使用放大倍數(shù)為100×-400×的光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞培養(yǎng)基的狀態(tài)。如果觀察到黑色斑點(diǎn)、桿狀物或螺旋狀物，那培養(yǎng)基應(yīng)該是被細(xì)菌污染了。由于細(xì)菌生長(zhǎng)快速，在污染后的48小時(shí)內(nèi)便可引起培養(yǎng)基的變化，使培養(yǎng)基變渾濁。若培養(yǎng)基中含有酚紅，由于細(xì)菌的新陳代謝使培養(yǎng)基的pH下降，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基的顏色迅速變?yōu)辄S色。因此在細(xì)菌污染48小時(shí)之后，便可用肉眼直接觀察。微生物污染后的細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)該棄去，但如果沒有其他替代的培養(yǎng)基可用，則可使用Invivogen的Plasmocin? Treatment, Normocure?或者?Plasmocure?污染物清除試劑。

當(dāng)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不確定具體是哪種細(xì)菌污染細(xì)胞時(shí)，應(yīng)該選擇哪種抗污染抗生素？

當(dāng)不確定細(xì)胞是被哪種細(xì)菌污染時(shí)，推薦使用對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌均有效，具有光譜抗性的Normocure?。目前的研究結(jié)果表明，Normocure?可有效預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)菌污染，例如葡萄球菌、無(wú)色桿菌。

?真菌污染

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)如何鑒別真菌污染？

由于真菌菌絲可用肉眼或光學(xué)顯微鏡觀察，因此真菌污染細(xì)胞培養(yǎng)基之后可直接通過(guò)肉眼或者光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)。酵母（30-10 um）是形態(tài)結(jié)構(gòu)最小的真菌，在光學(xué)顯微鏡下便可被觀察到。另外，真菌的生長(zhǎng)繁殖會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基中pH值增加，從而使含酚紅的培養(yǎng)基呈粉色。在大量真菌污染物存在的情況下，菌落可能形成霉菌，漂浮在培養(yǎng)基表面。此時(shí)應(yīng)立即丟棄培養(yǎng)基，以防孢子傳播。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為預(yù)防或清除真菌污染，F(xiàn)ungin?可以與青霉素、鏈霉素（Pen-Strep）同時(shí)使用嗎？

可以的，Fungin?可以與一般的抗生素如青霉素、鏈霉素一起使用。

Fungin?可以在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacConkey Agar）和血平板培養(yǎng)基中使用嗎？?

可以的，Fungin?可以在其他培養(yǎng)基，如麥康凱瓊脂培養(yǎng)基（MacConkey Agar）和血平板培養(yǎng)基中使用。

已經(jīng)使用Fungin?處理了7天，但不確定真菌污染是否已全部被清除，對(duì)于這個(gè)問(wèn)題有什么建議嗎？

Invivogen建議將培養(yǎng)基分成兩份，一份繼續(xù)使用Fungin?繼續(xù)處理3-4天，另外一份中加入無(wú)Fungin?或青霉素-鏈霉素的新鮮培養(yǎng)基，之后取1 mL至沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，將培養(yǎng)皿置于20-25℃ 3-5天。此方法可以幫您確認(rèn)培養(yǎng)基中的真菌污染物是否已全部被清除。

推薦使用什么濃度的Fungin?處理細(xì)胞？

說(shuō)明書中推薦使用50 ug/mL的Fungin?處理細(xì)胞，但I(xiàn)nvivogen建議同時(shí)做75 ug/mL的平行處理組，以估計(jì)去除真菌污染的最佳使用劑量。處理時(shí)間應(yīng)持續(xù)5-10天。

?支原體污染

如何使用Invivogen的支原體檢測(cè)試劑盒Plasmo TestTM檢測(cè)支原體？

PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒是一種基于細(xì)胞的比色分析方法，利用Toll樣受體II可以識(shí)別支原體成分（脂肽）的能力，誘導(dǎo)信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致NF-κB和其他轉(zhuǎn)錄因子的激活。在支原體存在的情況下，HEK-Blue?-2細(xì)胞表面表達(dá)的TLR2會(huì)激活這些轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而誘導(dǎo)分泌sAP（分泌性堿性磷酸酶）報(bào)告蛋白，可在16 - 24小時(shí)內(nèi)被HEK-Blue?檢測(cè)培養(yǎng)基檢測(cè)到。

Invivogen的支原體檢測(cè)試劑盒Plasmo TestTM只能檢測(cè)活的支原體嗎？

PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒是通過(guò)檢測(cè)支原體脂蛋白來(lái)判斷是否有支原體存在的，因此其既可以檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的活的支原體，也可以檢測(cè)死的支原體。

另外，Invivogen的PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒不僅可以檢測(cè)支原體的脂蛋白，也可以檢測(cè)細(xì)菌的脂蛋白。但是由于細(xì)菌污染可直接通過(guò)觀察細(xì)胞培養(yǎng)基的狀態(tài)進(jìn)行鑒定，因此，當(dāng)PlasmoTest?檢測(cè)試劑盒結(jié)果呈現(xiàn)陽(yáng)性，且細(xì)胞培養(yǎng)基無(wú)渾濁、顏色無(wú)變化時(shí)，可以斷定培養(yǎng)基受到了支原體污染。

Invivogen的支原體檢測(cè)試劑盒Plasmo TestTM與其他支原體檢測(cè)試劑盒相比，有什么優(yōu)勢(shì)嗎？

PlasmoTestTM是首款基于細(xì)胞分析原理檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中支原體污染的試劑盒，操作者只需具有基本的細(xì)胞培養(yǎng)的知識(shí)即可進(jìn)行操作。試劑盒在過(guò)夜孵育之后，一小時(shí)之內(nèi)即可獲得檢測(cè)結(jié)果。以往常用的支原體檢測(cè)方法是PCR，但這種檢測(cè)方法具有明顯的缺陷，例如假陰性結(jié)果且能夠檢測(cè)的支原體種類受引物限制，無(wú)法對(duì)全部支原體進(jìn)行檢測(cè)。最重要的是，Plasmo TestTM檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性時(shí)，即表明細(xì)胞培養(yǎng)基中存在支原體污染物，因此不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中使用哪種試劑來(lái)預(yù)防支原體污染？使用那種試劑清除已污染的支原體？

●?Plasmocin??prophylactic（支原體預(yù)防試劑）是專門用于預(yù)防支原體污染的，它含有兩種有效的殺菌成分，作用于蛋白質(zhì)合成和DNA復(fù)制。

●?Plasmocin??treatment（支原體清除試劑），可在2 - 3周內(nèi)快速有效地消除支原體污染。如果2-3周之后使用Plasmocin?支原體清除試劑之后無(wú)法有效清除支原體污染，或支原體對(duì)Plasmocin?產(chǎn)生了耐藥性，可使用●?Plasmocure?。Plasmocin??treatment和Plasmocure?均是由兩種不同抗生素混合而成，通過(guò)不同的機(jī)制發(fā)揮作用，可使支原體在2 - 3周內(nèi)徹底清除。

在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，可以直接使用Plasmocure?代替Plasmocin??treatment清除已污染的支原體嗎？

Plasmocin??treatment和?Plasmocure?均是混合抗生素，用于清除已污染支原體。然而，Invivogen推薦只有在支原體對(duì)Plasmocin??treatment產(chǎn)生抗性的情況下才可使用Plasmocure?。

如果支原體對(duì)Plasmocure?、Plasmocin??treatment均已產(chǎn)生抗性，應(yīng)該怎么辦呢？

如果使用Plasmocure?、Plasmocin??treatment均無(wú)法有效清除細(xì)胞中的支原體污染物，則表明樣本中的支原體污染非常嚴(yán)重。這種情況下最好的辦法是在下一次傳代時(shí)盡可能稀釋您的細(xì)胞，以此來(lái)稀釋細(xì)胞中的支原體污染物。之后使用不同濃度（確保對(duì)細(xì)胞不會(huì)有太大毒性的濃度）的Plasmocure?再次處理細(xì)胞2周，例如使用工作濃度為50 ug/mL和100 ug/mL的Plasmocure?處理細(xì)胞。處理2周之后，將細(xì)胞分成兩份，一份使用Plasmocure?繼續(xù)處理一周，另一份不添加任何抗生素，3天后使用PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)污染情況，以避免出現(xiàn)假陰性結(jié)果。如果您的細(xì)胞仍存在支原體污染，請(qǐng)重復(fù)以上步驟。

以上的操作步驟可有效清除90%的支原體污染，若您樣本中的支原體污染物未得到有效清除，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們。

Plasmocin??treatment支原體清除試劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)的支原體污染有效嗎？

Plasmocin??treatment對(duì)胞內(nèi)、胞外的支原體污染均有效。

我通常在T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中清除支原體污染，如果換用6孔板的話，清除效果會(huì)更好嗎？

在T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中清除支原體污染物是合適的。當(dāng)細(xì)胞的匯合度在60-70%及處于傳代時(shí)期時(shí)，支原體的清除效果最佳，因?yàn)檫@可以確保不斷去除支原體及添加新鮮的Plasmocin??treatment或?Plasmocure?支原體清除試劑。

使用Plasmocin??treatment處理細(xì)胞之后，取細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示支原體污染呈陰性，但幾周之后細(xì)胞再次受到了支原體污染應(yīng)如何處理？

非常抱歉，這種情況應(yīng)該是使用Plasmocin??treatment期間并未完全清除您樣本中的支原體污染物。為防止這種情況再次發(fā)生，Invivogen建議在使用Plasmocin??treatment處理2周之后，將細(xì)胞培養(yǎng)基分成兩份。一份繼續(xù)使用Plasmocin??treatment繼續(xù)處理1周，以防處理兩周后細(xì)胞培養(yǎng)基中仍存在微量支原體污染物而發(fā)生再次污染的情況。另一份使用不含任何抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞，3天之后進(jìn)行支原體檢測(cè)，以檢測(cè)使用Plasmocin??treatment處理2周之后細(xì)胞培養(yǎng)基中的支原體殘留量。

Plasmocin??treatment是否適用于清除昆蟲細(xì)胞內(nèi)的支原體污染?

Plasmocin??treatment適用于清除sf9細(xì)胞的內(nèi)的支原體污染，因此應(yīng)該同樣適用于其他昆蟲細(xì)胞，但是invivogen無(wú)將Plasmocin??treatment用于昆蟲細(xì)胞的案例及數(shù)據(jù)。

無(wú)菌污染-內(nèi)毒素污染

什么是無(wú)菌污染？這會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成什么問(wèn)題？

無(wú)菌污染物存在于無(wú)菌但仍有可能含有細(xì)菌成分的溶液和試劑中。內(nèi)毒素也被稱為脂多糖（LPS）或脂聚糖，是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分。內(nèi)毒素在體內(nèi)、體外均是有效的驗(yàn)證誘導(dǎo)劑。內(nèi)毒素污染是細(xì)胞培養(yǎng)和藥物生產(chǎn)中的主要問(wèn)題。因此，需格外注意無(wú)菌溶液和試劑的使用，檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)試劑中的內(nèi)毒素水平是非常重要的。有關(guān)內(nèi)毒素污染的更多信息，請(qǐng)查看細(xì)胞培養(yǎng)污染指南。

內(nèi)毒素污染的常見來(lái)源有哪些？

內(nèi)毒素的來(lái)源包括培養(yǎng)基、血清、水、緩沖液和其他細(xì)胞培養(yǎng)試劑，如胰蛋白酶。為了避免內(nèi)毒素污染，我們建議要求制造商提供內(nèi)毒素水平認(rèn)證，或在使用這些試劑之前，使用Invivogen的HEK-BlueTM?脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2進(jìn)行內(nèi)毒素水平檢測(cè)。

Invivogen的?HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒如何檢測(cè)脂多糖（LPS）？

HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2是一款基于細(xì)胞分析的比色試劑盒，專門用于檢測(cè)具有生物活性的內(nèi)毒素，可檢測(cè)低至0.01 EU/mL的微量脂多糖（LPS），其檢測(cè)原理是基于TLR4可識(shí)別革蘭氏陰性菌結(jié)構(gòu)上不同LPS的能力。微量（<0.01 EU/mL）脂多糖（LPS）的存在即可導(dǎo)致NF-κB的激活和分泌型堿性磷酸酶（SEAP）的產(chǎn)生。使用HEK-BlueTM進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，NF-κB激活可以用肉眼觀察或通過(guò)讀取OD650進(jìn)行定量。

您可以在以下文件中找到更多細(xì)節(jié)：細(xì)胞培養(yǎng)污染指南。

HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2總共可以進(jìn)行多少次實(shí)驗(yàn)？

HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2提供了1 mL的QB試劑和1 mL的QB緩沖液，這足夠制備100 mL的分泌型堿性磷酸酶檢測(cè)試劑-QUANTI-Blue?溶液，可供大約供5個(gè)96孔板（480孔）進(jìn)行分析。

HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2的敏感性如何？

HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2是高敏檢測(cè)試劑盒，可以檢測(cè)低至0.01 EU/mL的內(nèi)毒素。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果要使用HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2檢測(cè)內(nèi)毒素污染狀況，是否可以使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，如果可以，胎牛血清中的內(nèi)毒素水平最高可為多少？

由于胎牛血清（FBS）中可能含有內(nèi)毒素，因此其可能會(huì)影響HEK-Blue?-4細(xì)胞的功能，進(jìn)而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此如果要使用胎牛血清（FBS），請(qǐng)務(wù)必保證無(wú)內(nèi)毒素。因此，我們建議在購(gòu)買胎牛血清（FBS）之前，請(qǐng)要求供應(yīng)商提供內(nèi)毒素水平的認(rèn)證報(bào)告。

拆封之后，HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2的穩(wěn)定性如何？

收到HEK-Blue??脂多糖（LPS）檢測(cè)試劑盒2之后，應(yīng)立即對(duì)其中的HEK-Blue?細(xì)胞系進(jìn)行培養(yǎng)繁殖，以凍存細(xì)胞。由于細(xì)胞可以保存在液氮中，因此細(xì)胞沒有有效期。至于試劑盒的其他部分，如果按照說(shuō)明書中的要求正確儲(chǔ)存于適當(dāng)條件下，可穩(wěn)定1年的時(shí)間。

在檢測(cè)血液樣本中的脂多糖（LPS）含量時(shí)，如何避免NF-κB激活因子對(duì)NF-κB反應(yīng)的非特異性激活?

有兩種方法可以避免NF-κB激活因子對(duì)NF-κB反應(yīng)的非特異性激活：

使用HEK-Blue? Null1親本細(xì)胞系作為陰性對(duì)照。該細(xì)胞系只表達(dá)NFkB誘導(dǎo)系統(tǒng)（不表達(dá)負(fù)責(zé)LPS識(shí)別的TLR4受體），因此，HEK-Blue? Null1細(xì)胞可以檢測(cè)到任何非特異性的NFkB激活。

您可以使用Invivogen?Ultrapure LPS-RS拮抗TLR4反應(yīng)。如果使用該拮抗劑之后發(fā)現(xiàn)信號(hào)減弱，就可以確定樣本是TLR4特異性激活。該拮抗劑的參考文獻(xiàn)如下：LPS-RS ultrapure (#tlrl-prslps)。

??Primocin?

Primocin?含有四環(huán)素嗎？

不含，Primocin?不含四環(huán)素。

Primocin?用于預(yù)防支原體污染還是清除支原體污染？

PrimocinTM是一種預(yù)防性抗生素，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細(xì)菌以及支原體和真菌均有效。PrimocinTM不能用于清除已經(jīng)污染的細(xì)胞中的微生物。

應(yīng)如何儲(chǔ)存?Primocin?？

Primocin?在室溫運(yùn)輸。收到后可在4℃保存3個(gè)月，也可在-20℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年，期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。

??Normocin?

對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)說(shuō)，?Normocin?抗生素是必須要使用的嗎？

是的，Normocin?是常用的抗污染抗生素之一，Invivogen所有的細(xì)胞系都是用這種抗污染抗生素研發(fā)出來(lái)的，是實(shí)驗(yàn)室中細(xì)胞培養(yǎng)的常用抗生素。

Normocin?可以用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)嗎?

是的，Normocin?可以用于雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)。

應(yīng)如何儲(chǔ)存Normocin?？

Normocin?在室溫運(yùn)輸。收到后可在4℃保存3個(gè)月，也可在-20℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。

產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年，期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。在4℃無(wú)菌條件下可穩(wěn)定3個(gè)月。

預(yù)防性抗生素Normocin?和Plasmocin?的區(qū)別是什么？

Normocin?預(yù)防性抗生素是對(duì)支原體、細(xì)菌、真菌均有生物活性，而Plasmocin?預(yù)防性抗生素只是特異性預(yù)防支原體污染。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中需要一種廣譜性的抗污染抗生素，但是由于實(shí)驗(yàn)的特殊性，要求抗生素中不含酚紅。請(qǐng)問(wèn)Normocin?是否含有酚紅？如有有的話，是否還有其他可替代的符合我們實(shí)驗(yàn)要求的產(chǎn)品？

Normocin?抗生素中含有酚紅。如果如果您不能使用含有酚紅的添加劑，并且希望使用廣譜抗生素/抗真菌/抗支原體藥物，您可以使用PrimocinTM作為替代。

??NormocureTM

應(yīng)如何儲(chǔ)存NormocureTM？

NormocureTM在室溫運(yùn)輸。收到后可在4℃保存3個(gè)月，也可在-20℃長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。

產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年，期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。

Normocure?是否可以清除包括革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌在內(nèi)的所有細(xì)菌污染？

是的，Normocure?是一種針對(duì)革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的高效廣譜抗污染抗生素。像環(huán)境中的葡萄球菌和無(wú)色桿菌對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基造成的污染均可有效被Normocure?清除。

PlasmocinTM?Treatment（支原體清除試劑）

當(dāng)溶解2瓶相同批次的支原體清除試劑時(shí)，一瓶澄清透明，而另一瓶有沉淀，且37℃加熱或超聲處理后，沉淀并未溶解，請(qǐng)問(wèn)這是正常的嗎？為什么會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象？

沉淀物是凍融之后PlasmocinTM?Treatment中兩種抗生素之一。因?yàn)榭股卦谒峁舛认碌娜芙舛仁怯邢薜?，因此凍融?huì)使得抗生素在溶液中析出。出現(xiàn)這種情況之后不推薦使用超聲進(jìn)行處理，建議將其置于37℃下加熱30分鐘至1小時(shí)，然后渦旋1-2分鐘，這會(huì)使沉淀物重懸溶解。PlasmocinTM?Treatment在37℃條件下可穩(wěn)定一周的時(shí)間，因此無(wú)需擔(dān)心37℃條件下加熱1小時(shí)會(huì)影響PlasmocinTM?Treatment的穩(wěn)定性及作用效果。另外，您也可以使用無(wú)菌水對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行1:1稀釋。

當(dāng)使用支原體清除試劑處理細(xì)胞時(shí)，培養(yǎng)基中是否可以含有慶大霉素或抗真菌試劑？

Invivogen不推薦將PlasmocinTM?Treatment和其他抗生素，如慶大霉素及抗真菌試劑一起使用，因?yàn)檫@會(huì)影響它的活性。PlasmocinTM?Treatment在特定濃度下和對(duì)某些類型的細(xì)胞會(huì)表現(xiàn)出一定的毒性，因此將PlasmocinTM?Treatment和其他抗生素一起使用可能會(huì)使敏感的細(xì)胞系致死。

應(yīng)如何儲(chǔ)存支原體清除試劑？

PlasmocinTM?Treatment在室溫下運(yùn)輸。收到之后可在4℃穩(wěn)定1個(gè)月，或在-20℃條件下儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間，需注意避免重復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。

產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年，期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。

細(xì)胞已使用其他支原體去除試劑處理過(guò)，但未成功去除支原體污染，現(xiàn)在如果繼續(xù)使用PlasmocinTM?Treatment支原體清除試劑可行嗎？

如果可以的話，強(qiáng)烈建議在未使用其他支原體清除試劑的新鮮細(xì)胞上使用PlasmocinTM?Treatment支原體清除試劑，以確保細(xì)胞不會(huì)對(duì)PlasmocinTM?Treatment支原體清除試劑中的任何一種抗生素產(chǎn)生耐藥性。

??Plasmocure?

應(yīng)如何儲(chǔ)存Plasmocure?？

Plasmocure?支原體清除試劑在室溫下運(yùn)輸。收到之后可在4℃穩(wěn)定1個(gè)月，或在-20℃條件下儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間，需注意避免重復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。

產(chǎn)品拆封后可在-20°C保持穩(wěn)定1年，期間需避免反復(fù)凍融循環(huán)。在100 mg/mL及無(wú)菌條件下，將其儲(chǔ)存于4℃可穩(wěn)定3個(gè)月的時(shí)間。

??Plasmocin? Prophylactic（支原體預(yù)防試劑）

?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑的CAS號(hào)是多少？

?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑沒有cas號(hào)，因?yàn)樗遣煌股氐幕旌衔铩?/span>

?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑中是否存在鈣鹽？

?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑中不含鈣鹽。

應(yīng)如何儲(chǔ)存?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑？

?Plasmocin? Prophylactic支原體預(yù)防試劑在室溫下運(yùn)輸，收到之后可在4℃下穩(wěn)定儲(chǔ)存一個(gè)月，要想穩(wěn)定儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間，請(qǐng)置于-20℃條件下儲(chǔ)存，請(qǐng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。

開封后，可在-20℃條件下穩(wěn)定一年，期間需避免重復(fù)凍融循環(huán)。

??Fungin?

Fungin?含有兩性霉素B嗎？

Fungin?不含兩性霉素B，與兩性霉素B不同，Fungin?是一種高度穩(wěn)定的化合物，它不需要溶解在有毒的脫氧膽酸鹽中。

應(yīng)如何儲(chǔ)存Fungin??？

Fungin??在室溫下運(yùn)輸，收到之后可在4℃下短期儲(chǔ)存，要想穩(wěn)定儲(chǔ)存更長(zhǎng)時(shí)間，請(qǐng)置于-20℃條件下儲(chǔ)存，請(qǐng)避免反復(fù)凍融循環(huán)。

具體的有效期在產(chǎn)品標(biāo)簽上。

開封后，若在-20℃條件下，可穩(wěn)定一年，期間需避免重復(fù)凍融循環(huán)。若在10 mg/mL的濃度下置于4℃無(wú)菌條件下，可穩(wěn)定儲(chǔ)存3個(gè)月。

??PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒

PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒可以檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)菌污染嗎？

PlasmoTest?支原體檢測(cè)原理是基于TLR2的激活，因此它可以檢測(cè)支原體和細(xì)菌污染。但是，支原體污染不能用肉眼檢測(cè)到，而細(xì)菌污染中由于細(xì)胞的生長(zhǎng)繁殖會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH下降，進(jìn)而導(dǎo)致培養(yǎng)基渾濁及顏色變化，因此可以結(jié)合肉眼觀察培養(yǎng)基是否出現(xiàn)異常來(lái)判斷培養(yǎng)基中是否存在支原體污染。

使用PlasmoTest?支原體試劑盒檢測(cè)之后，應(yīng)該在哪個(gè)波長(zhǎng)下讀取吸光值？

吸光值的讀取可以在620 nm-655 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行。根據(jù)我們對(duì)于QUANTI-Blue溶液的分析，對(duì)于無(wú)法滿足620 nm-655 nm波長(zhǎng)的讀板儀，可以在600-680 nm波長(zhǎng)區(qū)間內(nèi)進(jìn)行吸光值的讀取。但是，這樣得到的結(jié)果可能會(huì)存在低飽和度及高背景的問(wèn)題。

當(dāng)使用PlasmoTest?支原體試劑盒檢測(cè)支原體污染時(shí)，應(yīng)該使用多少細(xì)胞？

在收集上清液的同時(shí)收集細(xì)胞是很重要的，因?yàn)槿绻?xì)胞內(nèi)也存在支原體污染的話，可以同時(shí)檢測(cè)到細(xì)胞內(nèi)的支原體以及上清液中細(xì)胞外的支原體。

為什么使用PlasmoTest?支原體試劑盒檢測(cè)支原體污染時(shí)，樣本需要加熱？

所有樣本必須加熱以去除上清液血清中可能存在的堿性磷酸酶，因?yàn)檫@可能會(huì)干擾檢測(cè)結(jié)果。此外，加熱步驟可以消除樣本中殘留的支原體，以避免污染擴(kuò)散。

PlasmoTest?支原體試劑盒中提供的陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照分別是什么？

由于信息是專有的，所以非常抱歉不能透露任何與對(duì)照品相關(guān)的信息。但是請(qǐng)放心，陽(yáng)性對(duì)照不是活的支原體。

當(dāng)使用PlasmoTest?支原體試劑盒時(shí)得到了假陽(yáng)性結(jié)果，是否是由于添加了二甲基亞砜（DMSO）,?胎牛血清（FBS）,?胰蛋白酶（Trypsin）或?PBS磷酸緩沖液影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果？

在研發(fā)PlasmoTest?支原體檢測(cè)試劑盒時(shí)，我們已經(jīng)證明某些胰蛋白酶和血清會(huì)誘導(dǎo)TLR2反應(yīng)。高濃度DMSO（例如小于1/1000的稀釋）的使用會(huì)對(duì)HEK-Blue?細(xì)胞產(chǎn)生毒性，進(jìn)而導(dǎo)致背景值比較高。PBS緩沖液應(yīng)該不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。建議單獨(dú)測(cè)試培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。

當(dāng)使用PlasmoTest?試劑盒進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí)，包括陰性對(duì)照在內(nèi)的所有孔均變?yōu)樗{(lán)色，該如何解釋呢？

有3種可能的原因會(huì)導(dǎo)致所有的孔變?yōu)樗{(lán)色：

1?這可能是由于培養(yǎng)基中存在堿性磷酸酶（AP）。為了驗(yàn)證是否存在這種情況，可以進(jìn)行一個(gè)非常簡(jiǎn)單的測(cè)試。只需在200μL的重懸HEK-Blue?檢測(cè)試劑中添加50μL用于細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基（無(wú)細(xì)胞）。如果培養(yǎng)基變藍(lán)，則是由于培養(yǎng)基血清中存在堿性磷酸酶（AP）。此時(shí)需加熱培養(yǎng)基以去除堿性磷酸酶（AP）并重新進(jìn)行相同的測(cè)試。放置相同的“測(cè)試”樣本應(yīng)得到陰性結(jié)果。

2?如果將培養(yǎng)基加入到HEK-Blue?檢測(cè)試劑中無(wú)反應(yīng)，則可能是由于HEK-Blue? -2細(xì)胞受到污染導(dǎo)致所有的孔變?yōu)樗{(lán)色，此時(shí)最佳的選擇是換用新的細(xì)胞。請(qǐng)注意，在此過(guò)程中最好使用濾嘴避免細(xì)胞污染。

3?還有可能是在測(cè)試之前對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng)導(dǎo)致所有孔變?yōu)樗{(lán)色。Invivogen提供以下建議以降低背景信號(hào)值，避免在刺激細(xì)胞之前NF-κB的激活，從而避免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果：

● 使用預(yù)熱的PBS清洗細(xì)胞

●?使用熱滅活的胎牛血清（FBS），有些胎牛血清（FBS）雖然無(wú)菌，但含有可能激活HEK-Blue?-2細(xì)胞的微生物碎片

●?在刺激細(xì)胞之前請(qǐng)勿離心

●?請(qǐng)勿使用胰蛋白酶

PlasmoTest?試劑盒中陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的OD值在什么范圍內(nèi)是正常的？

陽(yáng)性對(duì)照的OD630nm在0.9-1.2范圍內(nèi)是正常的，陰性對(duì)照的OD630nm需小于0.2.

不小心將要測(cè)試的上清液在室溫下放置了2天，這會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果嗎？

如果樣本本身無(wú)菌且置于無(wú)菌的室溫條件下是不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的。但是如果不能立即檢測(cè)收集好的上清液，建議您置于-20℃冷凍儲(chǔ)存。

當(dāng)?HEK Blue?-2細(xì)胞開始生長(zhǎng)匯合之后，推薦使用什么分流比進(jìn)行分流。

分流比取決于細(xì)胞什么時(shí)候需要匯合。一般HEK-Blue??細(xì)胞的增值時(shí)間大概是24小時(shí)。因此，如果分流比為1:2時(shí)，細(xì)胞應(yīng)該在第二天匯合。如果分流比為1:4，則細(xì)胞應(yīng)該在兩天后匯合。

在陽(yáng)性對(duì)照及陰性對(duì)照試劑瓶中能夠看到粉末狀的試劑嗎？

陽(yáng)性對(duì)照是一種透明的脂質(zhì)膜，通常很難用肉眼觀察。而陰性對(duì)照是一種可見的粉末。

PlasmoTest?試劑盒可以檢測(cè)血清、血漿樣本嗎？如果可以的話，哪種樣本的檢測(cè)結(jié)果會(huì)更好一些？

Invivogen只在PlasmoTestTM試劑盒中的HEK-BlueTM-2細(xì)胞上測(cè)試過(guò)幾次血漿和血清樣本。結(jié)果表明，與使用標(biāo)準(zhǔn)樣品（在DMEM中）相比，血清樣品的敏感性只有一個(gè)對(duì)數(shù)差異。例如，在血清中，我們可以加檢測(cè)到高達(dá)10^4的UFC/ml發(fā)酵支原體，而在DMEM中，我們可以檢測(cè)到10^3的UFC/ml發(fā)酵支原體。另一方面，我們發(fā)現(xiàn)DMEM和血漿樣本之間存在3個(gè)對(duì)數(shù)差異。例如，在血漿中，支原體濃度高達(dá)10^6 UFC/ml才可被檢測(cè)到，而在DMEM中，10^3 UFC/ml的支原體便可被檢測(cè)到。因此，PlasmoTestTM試劑盒對(duì)血清樣本的敏感性要高于血漿樣本，更建議使用血清樣本而非血漿樣本。

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