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vectorlabs——凝集素篇(一)

2021-05-17
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背景知識


凝集素(Lectins)是動物細胞和植物細胞都能夠合成和分泌的、能與糖結(jié)合的蛋白質(zhì)。因其能凝集紅血球(含血型物質(zhì)),故名凝集素。如今,凝集素指所有糖結(jié)合蛋白,不管其是否能凝集紅細胞。凝集素能識別糖蛋白和糖肽中,特別是細胞膜中復雜的碳水化合物結(jié)構(gòu),即細胞膜表面的碳脂化合物決定簇。一種凝集素具有對某一種特異性糖基專一性結(jié)合的能力。凝集素在生物識別現(xiàn)象中發(fā)揮作用,涉及細胞和蛋白的識別,比如:一些病毒利用凝集素將其附著在宿主細胞上。目前,已經(jīng)在植物、病毒、微生物和動物中發(fā)現(xiàn)了凝集素,但許多生物學功能仍待探究。


大多數(shù)凝集素為多聚體,由非共價連接的亞基組成。這種多聚化賦予了凝集素凝集細胞和與糖結(jié)合物形成沉淀的能力(類似于抗原-抗體反應)。凝集素與糖結(jié)構(gòu)的結(jié)合具有高度的特異性。凝集素與其受體的結(jié)合親和力因其受體糖結(jié)構(gòu)的細微變化而有較大差異。

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〈?凝集素在動物中的作用

凝集素在動物中發(fā)揮不同的生物學功能,從細胞黏附到糖蛋白合成的調(diào)控,以及血液中蛋白水平的調(diào)控。

也可與胞外及胞內(nèi)的可溶性糖蛋白結(jié)合。有些凝集素存在于哺乳動物肝細胞表面,可特異性識別半乳糖(galactose)殘基。這些表面受體的作用在于從循環(huán)系統(tǒng)中清除某些糖蛋白。另外一凝集素也是一個受體,可識別含甘露糖-6-磷酸的水解酶(mannose-6-phosphate), 而將靶蛋白轉(zhuǎn)入溶酶體。

已知,凝集素在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要重用,可識別廣泛存在于病原體上的糖。例如凝集素補體活化途徑(complement activation pathway )和甘露糖結(jié)合凝集素(mannose-binding lectin)。

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〈?凝集素在植物中的作用

凝集素在植物 (豆科凝集素,Legume lectins) 中的功能仍不確切。植物種子中的凝集素隨植物生長,其濃度大量降低,表明凝集素在植物種子萌發(fā)及種子存活方面發(fā)揮重要作用。

研究發(fā)現(xiàn),許多植物凝集素識別的并非糖配體,這些配體主要以疏水性配體為主包括腺嘌呤、植物激素、細胞分裂素、吲哚乙酸,也包括水溶性的植物激素。

凝集素在凝集紅細胞方面與抗體有類似的能力,但凝集素并非免疫細胞的組分。

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〈?凝集素純化方法

?傳統(tǒng)方法

鹽誘導結(jié)晶(salt-induced crystallization)、乙醇沉淀(ethanol ?precipitation)、離子交換層析(Ion exchange chromatography)、凝膠過濾

?親和層析

(affinity chromatography)

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利用凝集素和糖結(jié)構(gòu)的特異性結(jié)合特性



Vectorlabs公司既采用傳統(tǒng)方法也采用親和層析方法。產(chǎn)品經(jīng)多種方法驗證,如抗血清免疫沉淀、凝集滴度、多聚酰胺凝膠電泳、特異性親和柱 結(jié)合活性分析等。

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凝集素結(jié)合特異性指南

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?凝集素

?Fucose(Fuc)

?AAL,LTL, UEA I

?Galactose(GalNAc)?

?ACL, ECL, EEL, GSL, GSL I-B4, Jacalin, MAL I, PNA, RCA I, ?RCA II, SBA

?Glucose(Glc)

?Con A, LCA, PSA

?Mannose(Man)?

?Con A, GNL, HHL, LCA, NPL, PSA

?N-Acetylgalactosamine

?(GalNAc)

?BPL, DBA, GSL I, MPL, PTL, RCA I, RCA II, SJA, SBA, VVA, WFA

?N-Acetylglucosamine(GlcNAc)

?DSL, GSL II,LEL, STL, WGA

?Sialic Acid(SA)

?MAL II, SNA

?Complex Structures

?PHA-E, PHA-L


Vectorlabs供應凝集素類型?

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〈?瓊脂糖結(jié)合凝集素

凝集素親和層析是一種簡廣泛應用的用于分離糖復合物的技術(shù)。糖復合物與固定的凝集素結(jié)合,未結(jié)合的物質(zhì)被洗掉,再經(jīng)過糖蛋白洗脫液(抑制凝集素的結(jié)合)洗脫即可。

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通過此方法,可分離純化可溶性蛋白、激素、抗原、多糖、洗滌劑可溶性膜結(jié)合糖復合物,細胞表面受體、血型物質(zhì)、病毒糖蛋白、組織相容性抗原,淋巴因子、酶、淋巴細胞標記、血清蛋白、胚胎抗原等。

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Vectorlabs選擇親和純化的凝集素,采用耐熱的、交聯(lián)度4%的瓊脂糖珠作為固相基質(zhì),通過共價結(jié)合的方式,在凝集素和瓊脂糖珠間插入一個親水間隔臂。這種結(jié)合方式可維持凝集素活性,最小化結(jié)合凝集素發(fā)生的構(gòu)象變化,避免可能造成的非特異性離子或疏水反應的發(fā)生。

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產(chǎn)品特點

● 最大化保留結(jié)合凝集素的碳水化合物結(jié)合活性

●?在較廣的pH范圍內(nèi)線性穩(wěn)定

●?與瓊脂糖珠結(jié)合的蛋白復合物不易被Tris或常規(guī)的Buffer洗脫

●?非特異性結(jié)合少

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〈?帶標記凝集素

某些凝集素經(jīng)高度復合后仍具有較高的活性,可溶,非特異性結(jié)合低,而有些則不能。

Vectorlabs提供的每個帶標記的凝集素具有適當數(shù)量的熒光基團與或生物素,從而提供了最佳的凝集素染色特性。


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