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GeneTex重組兔單克隆抗體,助力您的科研之路

2024-07-19
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自1997年始,GeneTex一直致力于為科研、醫(yī)藥、診斷開發(fā)高質(zhì)量水平的抗體。目前市場上存在很多低質(zhì)量的抗體,主要表現(xiàn)在有明顯的非特異性信號;為了提供抗體的特異性和可重復性,必須解決兩個問題,第一是廣泛采用重組抗體技術(shù)的生產(chǎn)平臺,第二是采取更多的驗證策略。為了通過創(chuàng)新技術(shù)給客戶提供更好的產(chǎn)品,GeneTex已將所有新生產(chǎn)轉(zhuǎn)向重組兔單克隆抗體,也采取更多的驗證策略,提供更多的高質(zhì)量水平抗體。


什么是重組抗體?

重組抗體 (Recombinant antibody,rAb) 是通過傳統(tǒng)雜交瘤方法、單獨或組合展示策略、從免疫動物中分選單個B細胞或通過任一種方法獲得的選定單克隆抗體的克隆。重組抗體是由其一級序列定義的,可以對其進行工程改造以優(yōu)化親和力并以不同的結(jié)合形式表達,重組抗體的眾多優(yōu)點已得到充分證明,其中性能的一致性至關(guān)重要。

GeneTex的重組抗體生產(chǎn)采用以多參數(shù)FACS為基礎(chǔ)的方法,從免疫動物中分離抗原特異性IgG+記憶B細胞,隨后將抗體可變區(qū)基因克隆到IgG主鏈中,并在哺乳動物細胞中表達(圖1)(ref 1)。該方法非常快速,可以在幾周內(nèi)完成,并且還提供了鑒別出在各種應(yīng)用中具有不同功能抗體的機會,重要的是,它是從同一B細胞克隆重鏈和輕鏈,從而保留自然配對,一旦完成克隆,特定的重組抗體就可以取之不盡用之不竭,并且具有出色的重復性。

GeneTex重組兔單克隆抗體,助力您的科研之路

圖1:GeneTex 重組兔單克隆抗體生產(chǎn)流程(Starkie 等人 (2016))


GeneTex重組兔單克隆抗體

GeneTex 的生產(chǎn)重點是創(chuàng)建新型重組兔單克隆抗體,并使用國際抗體驗證工作組(IWGAV)定義的嚴格方法進行驗證。結(jié)合重組抗體生產(chǎn)的重點,GeneTex對抗體可靠性的第二個承諾是將依照上述IWGAV提出的嚴格驗證方法納入其制造和質(zhì)量保證 (QA) 工作流程(ref 2),使用IWGAV報告定義的五個驗證策略中的至少一個來評估每個抗體,GeneTex版本的IWGAV遵循五個驗證策略,包括 (1) 敲除敲弱策略;(2) 比較抗體策略;(3) 免疫捕獲及質(zhì)譜分析(IP/MS);(4) 生物特性與正交策略;(5) 蛋白過表達策略(圖2)。在提及新的重組抗體生產(chǎn)時,GeneTex將此稱為“5+1”驗證策略,“+1”指的是來自于重組抗體生產(chǎn)過程中的事前驗證。

使用上述生產(chǎn)和驗證方法生成和評估的新重組兔單克隆抗體(這些產(chǎn)品在其克隆名稱中用“HL”標識)。這僅僅是一個開始,GeneTex還致力于用新的重組抗體取代其成功的多克隆體。

GeneTex重組兔單克隆抗體,助力您的科研之路

圖2:GeneTex用于重組抗體驗證的“5+1”驗證策略


為什么GeneTex源自于兔的HL克隆是更好的選擇?

GeneTex的重組兔單克隆抗體生產(chǎn)工藝是全部源自于兔的新型抗體生成平臺(ref 1),這些產(chǎn)品通過其各自克隆號中的“HL”名稱進行區(qū)分(例如“[HL1089]”)。

眾所周知,兔的免疫系統(tǒng),可以為產(chǎn)生單克隆抗體帶來以下顯著優(yōu)勢(圖3)(ref 3):

l?? 更廣泛的抗體庫

1、兔屬于兔形目,在進化上與嚙齒目不同,說明人類抗原呈現(xiàn)的表位在兔中通常比在小鼠中更具有免疫原性,從而增加了生成的抗體數(shù)量,這些抗體反過來可能與鼠蛋白同源物發(fā)生交叉反應(yīng) (ref 3-6)。

2、兔免疫系統(tǒng)在對半抗原或小分子抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)方面更成功,而鼠免疫系統(tǒng)通常不會出現(xiàn)這種情況 (ref 3-6)。

3、用于產(chǎn)生單克隆抗體的小鼠來自近交系,其免疫原性的反應(yīng)多樣性低于兔;且小鼠脾臟比兔子脾臟小得多 (ref 3-6)。

4、兔的免疫系統(tǒng)與小鼠和人類的不同之處在于,除了執(zhí)行與小鼠和人類相同的V(D)J和VJ重組以及體細胞超突變 (SHM) 機制之外,它還利用體細胞基因轉(zhuǎn)換 (SGC) 來擴展其抗體范圍,抗體多樣性通過其他過程進一步增強,包括kappa輕鏈可變基因結(jié)構(gòu),其獨特之處在于互補決定區(qū)3 (LCDR3) 長度的可變性,以及骨髓、腸道相關(guān)淋巴組織中的連續(xù)Ig發(fā)育,以及脾臟和淋巴結(jié)生發(fā)中心(ref 4,6)。

l?? 更簡單的Ig結(jié)構(gòu)

1、已知歐洲兔(Oryctolagus cuniculus)具有IgE和IgM單一基因,沒有IgD基因。有趣的是,它的基因組包含13個IGHA基因,編碼至少10個功能性IgA亞類,盡管存在等位基因變異,但兔只有一種IgG基因(沒有亞類),因此與小鼠和人類(各有4個IgG亞類)不同 (ref 5,6)。

2、除了人或小鼠IgG中發(fā)現(xiàn)的二硫鍵(將重鏈對或一條重鏈與其相關(guān)輕鏈連接)之外,兔IgG抗體在其K1輕鏈中還表現(xiàn)出獨特的鏈內(nèi)二硫鍵,新西蘭白兔中大約90%的IgG是IgG-k (K1),并且這種額外的鍵被認為賦予兔IgG穩(wěn)定性 (ref 3,6)。

l?? 更高的結(jié)合親和力

1、兔單克隆抗體具有非常高的親和力,Kd值在皮摩爾范圍內(nèi),其中一些具有極低的皮摩爾Kd值 (ref 3,6)。

2、皮摩爾Kds意味著更高的靈敏度和一致的特異性。

l?? 更大的淋巴細胞庫

1、兔的壽命更長,而且體型更大(三個月大的兔子和六周大的小鼠的體重可能相差100倍),大大地方便了抗體生產(chǎn)過程中的血液和組織取樣 (ref 6)。

2、與鼠脾臟相比,兔脾臟可分離出多50倍的B細胞,這說明有更多可識別更廣泛表位的克隆可以選擇 (ref 3-6)。

GeneTex重組兔單克隆抗體,助力您的科研之路

圖3:兔生產(chǎn)單克隆抗體的優(yōu)勢


部分精選重組兔單克隆抗體

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G蛋白偶聯(lián)受體,GPCRs

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RAI3 antibody [HL1864]

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GTX636952

Dopamine Receptor D2 antibody [HL1478]

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GTX639056

CXCR2 antibody [HL2604]

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腫瘤研究

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RAS (G12D Mutant) antibody [HL10]

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PD-L1 antibody [HL1041]

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53BP1 antibody [HL275]

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神經(jīng)科學研究

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Iba1 antibody [HL22]

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GFAP antibody [HL1307]

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GTX636586

Calbindin antibody [HL2378]

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病毒研究

GTX637298

Zika Virus Envelope protein antibody [HL1699]

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GTX636703

ASFV p54 antibody [HL1289]

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GTX636318

Influenza A Virus Nucleoprotein antibody [HL1103]

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免疫學研究

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IL1 beta antibody [HL1421]

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GTX632502

CXCL16 antibody [GT516]

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GTX636896

Gasdermin D antibody [HL1430]

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代謝研究

GTX637799

Apolipoprotein B antibody [HL1962]

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GTX636995

FABP4 antibody [HL1521]

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GTX638193

Fatty Acid Synthase antibody [HL2161]

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蛋白翻譯后修飾相關(guān)抗體

GTX635617

ERK1 (phospho Thr202/Tyr204) + ERK2 (phospho Thr185/Tyr187) antibody [HL173]

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ATM (phospho Ser1981) antibody [HL1062]

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JNK (phospho Thr183/Tyr185) antibody [HL1008]

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細胞器標記

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alpha Tubulin antibody [HL2162]

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GTX70141

DNA ligase I antibody [10H5]

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GTX636469

Cytokeratin 19 antibody [HL1165]

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表位標記、報告和載體抗體

GTX637082

HA tag antibody [HL1603]

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GTX637570

GFP antibody [HL1845]

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GTX637460

CRM197 antibody [HL1808]

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參考文獻

1、Starkie, Dale O et al. “Generation of Recombinant Monoclonal Antibodies from Immunised Mice and Rabbits via Flow Cytometry and Sorting of Antigen-Specific IgG+ Memory B Cells.”?PloS one?vol. 11,3 e0152282. 29 Mar. 2016, doi:10.1371/journal.pone.0152282.

2、Uhlen, Mathias et al. “A proposal for validation of antibodies.”?Nature methods?vol. 13,10 (2016): 823-7. doi:10.1038/nmeth.3995.

3、Feng, Lifeng et al. “Rabbit monoclonal antibody: potential application in cancer therapy.”?American journal of translational research?vol. 3,3 (2011): 269-74.

4、Mage, Rose G et al. “B cell and antibody repertoire development in rabbits: the requirement of gut-associated lymphoid tissues.”?Developmental and comparative immunology?vol. 30,1-2 (2006): 137-53. doi:10.1016/j.dci.2005.06.017.

5、Pinheiro, A., Neves, F., Lemos de Matos, A. et al. An overview of the lagomorph immune system and its genetic diversity. Immunogenetics 68, 83–107 (2016).

6、Weber, Justus et al. “From rabbit antibody repertoires to rabbit monoclonal antibodies.”?Experimental & molecular medicine?vol. 49,3 e305. 24 Mar. 2017, doi:10.1038/emm.2017.23.



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