單克隆抗體和多克隆抗體,雖然只有一字之差,但是兩者的區(qū)別,還是比較大的,本篇欣欣就為各位科研的老師們整理單克隆抗體與多克隆抗體的區(qū)別,供大家參考使用。
單克隆抗體
特點(diǎn):
不易產(chǎn)生批次間差異。
僅由一種抗體亞型組成(例如 IgG1、IgG2、IgG3)。如需使用二抗進(jìn)行檢測(cè),應(yīng)針對(duì)正確的亞類選擇抗體。
抗體制備:
技術(shù)要求較高。
應(yīng)用技術(shù)之前需接受專門(mén)培訓(xùn)。
需要花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間制備雜交瘤細(xì)胞。
優(yōu)點(diǎn):
制得的雜交瘤細(xì)胞為持續(xù)且可再生產(chǎn)的單克隆抗體來(lái)源,而且所有批次均相同,有助于提升實(shí)驗(yàn)過(guò)程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化水平。
單克隆抗體只檢測(cè)每個(gè)抗原上的一個(gè)表位,因此具有以下優(yōu)點(diǎn):
切片和細(xì)胞染色產(chǎn)生的背景信號(hào)更少。特異性地檢測(cè)一個(gè)靶表位,不易與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
由于具有高特異性,單克隆抗體非常適于用作實(shí)驗(yàn)中的一抗,其產(chǎn)生的背景染色信號(hào)通常顯著低于多克隆抗體。
相較于多克隆抗體,單克隆抗體的同質(zhì)性非常高。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下,單克隆抗體實(shí)驗(yàn)之間的結(jié)果重現(xiàn)性非常高。
得益于其高特異性,單克隆抗體能夠在相關(guān)分子的混合物中(例如在親和純化過(guò)程中)極為高效地結(jié)合抗原。
缺點(diǎn):
特異性過(guò)高,以致于無(wú)法進(jìn)行跨物種的檢測(cè)。
與多克隆抗體相比,更易受化學(xué)處理造成的抗原表位丟失的影響。這可通過(guò)合并靶抗原相同的兩種或多種單克隆抗體進(jìn)行補(bǔ)償(例如使用抗體組合試劑盒)。
多克隆抗體
特點(diǎn):
識(shí)別任一抗原上的多個(gè)表位。所得血清為異質(zhì)性抗體混合物,其親和力各有不同。
多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。
通常使用多肽免疫原制備以獨(dú)有表位為靶標(biāo)的多克隆抗體,尤其是針對(duì)高同源性的蛋白家族。
抗體制備:
制備成本低廉且制備速度較快。
制備過(guò)程比單克隆抗體簡(jiǎn)單。
優(yōu)點(diǎn):
多克隆抗體可識(shí)別任一抗原上的多個(gè)表位,因此具有以下優(yōu)點(diǎn):
高親和性:由于靶蛋白上的多個(gè)表位能夠結(jié)合不止一個(gè)抗體分子,多克隆抗體可放大低表達(dá)水平靶蛋白的信號(hào)。但是,這會(huì)影響定量實(shí)驗(yàn)(如流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn))結(jié)果的準(zhǔn)確性。
可識(shí)別多個(gè)表位,有利于免疫沉淀 (IP) 和染色質(zhì)免疫沉淀 (ChIP) 實(shí)驗(yàn)獲得更好的結(jié)果。
與單克隆抗體相比,對(duì)微小抗原變化(例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或者輕微變性)的包容性更強(qiáng)。
可識(shí)別與免疫原蛋白質(zhì)具有高度同源性的蛋白質(zhì),還可用于篩查非免疫原物種的靶蛋白。
通常是檢測(cè)變性蛋白質(zhì)的首選。
多表位通??商嵘龣z測(cè)的穩(wěn)定性。
缺點(diǎn):
易產(chǎn)生批次間差異。
產(chǎn)生大量非特異性抗體,可能會(huì)在某些應(yīng)用中產(chǎn)生背景信號(hào)。
由于具有多個(gè)表位,檢測(cè)免疫原序列的交叉反應(yīng)性非常重要。
不適用于探測(cè)抗原的特定結(jié)構(gòu)域,因?yàn)榭寡逋ǔ?huì)識(shí)別多個(gè)結(jié)構(gòu)域。
單克隆與多克隆抗體的主要區(qū)別總結(jié):
單克隆抗體
| 多克隆抗體 |
制備成本高昂 | 制備成本低廉 |
應(yīng)用技術(shù)之前需接受專門(mén)培訓(xùn) | 制備技能要求不高 |
需要較長(zhǎng)的時(shí)間制備雜交瘤細(xì)胞 | 制備速度較快 |
產(chǎn)生大量特異性抗體 | 產(chǎn)生大量非特異性抗體 |
僅識(shí)別一個(gè)抗原上的單一表位 | 識(shí)別任一抗原上的多個(gè)表位 |
制得的雜交瘤細(xì)胞為持續(xù)且可再生產(chǎn)的單克隆抗體來(lái)源 | 批次間可能存在差異 |
批次間無(wú)差異或差異較小 | - |
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