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單細(xì)胞蛋白印跡技術(shù)

2021-04-30
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?在干細(xì)胞分化、發(fā)育、癌變、藥物作用,免疫應(yīng)答等方面,單個細(xì)胞的反應(yīng)具有不均一性。隨著科技的進(jìn)步,從基因組和轉(zhuǎn)錄組去研究細(xì)胞間特異性作用發(fā)展迅速,但目前在微生物和哺乳動物中,采用單細(xì)胞或其他與細(xì)胞數(shù)量相關(guān)的研究顯示,通過比較轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組發(fā)現(xiàn)的mRNA和蛋白質(zhì)的聯(lián)系非常少。

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為了研究大量細(xì)胞各自多樣且稀有的行為特征,需要一個能分析大量單細(xì)胞蛋白表達(dá),同時不帶可能影響蛋白和細(xì)胞功能的標(biāo)記的技術(shù),從而提供高質(zhì)量、高特異性分析目的蛋白的方法。
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來自伯克利加州大學(xué)生物工程系的研究小組為了檢驗(yàn)細(xì)胞之間由蛋白質(zhì)介導(dǎo)的細(xì)胞功能區(qū)別,開發(fā)了一個能在四小時左右同時檢測103個細(xì)胞的單細(xì)胞蛋白印跡技術(shù)(scWestern)。作者應(yīng)用該方法監(jiān)控大鼠神經(jīng)干細(xì)胞單個細(xì)胞的區(qū)別及其對分裂素刺激的反應(yīng),這些研究結(jié)果對于研究大量單個細(xì)胞的復(fù)雜而獨(dú)特的蛋白質(zhì)功能有重要的意義。這一研究發(fā)表在2014年7月《nature method》雜志上。
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scWestern步驟與常規(guī)蛋白印跡(western blot)所有重要的步驟一致,大致方法如下:在顯微鏡用的載玻片上鋪上30μm厚的光感聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行Western Blot:將單個的細(xì)胞放進(jìn)微孔中,原位裂解,進(jìn)行凝膠電泳,光感印跡啟動固定蛋白和抗體探針。
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scWestern能對目標(biāo)蛋白進(jìn)行定量,每單個細(xì)胞能檢測11種目的蛋白,檢測閾值小于30,000分子,當(dāng)與流式細(xì)胞儀連用的時候,能對低至200個細(xì)胞進(jìn)行分析。scWestern能用于研究干細(xì)胞對體外相同刺激下不同細(xì)胞的信號傳導(dǎo)和分化的區(qū)別,解決了抗體的精準(zhǔn)性和敏感性問題,并且建立了一個在單細(xì)胞級別對細(xì)胞群體進(jìn)行復(fù)雜分析的通用工具。


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