目前，全球科研工作者都在為開發(fā)SARS-CoV-2疫苗而進(jìn)行努力。雖然抗SARS-CoV-2抗體反應(yīng)的研究越來越多，但我們對SARS-CoV-2特異性T細(xì)胞反應(yīng)的了解才剛剛開始。因此，當(dāng)務(wù)之急是深入了解其反應(yīng)，從而協(xié)助疫苗設(shè)計(jì)并提供工具來評估疫苗誘導(dǎo)的T細(xì)胞反應(yīng)。多項(xiàng)研究表明，與健康個(gè)體的T細(xì)胞相比，從COVID 19患者中分離出來的T細(xì)胞效應(yīng)功能受損，抑制性受體表達(dá)水平更高，且這種現(xiàn)象隨著病情加重而增加。Seminal及其同事首次證實(shí)了T細(xì)胞特異性識別SARS-CoV-2，他們的研究表明來自COVID-19患者的CD4和CD8 T細(xì)胞可以識別大量來自SARS-CoV-2的肽段庫中的多肽，且得到了其他文獻(xiàn)的支持。但是，目前尚不清楚是哪些確切的表位驅(qū)動(dòng)了T細(xì)胞對SARS-CoV-2的反應(yīng)。T細(xì)胞識別的確切病毒表位，以及T細(xì)胞識別的最具免疫原性的表位(即免疫優(yōu)勢表位)，這些表位的確定將有助于指導(dǎo)疫苗設(shè)計(jì)，并可成為開發(fā)監(jiān)測SARS-CoV-2特異性T細(xì)胞反應(yīng)的工具。

到目前為止，大部分的工作都集中在鑒定表位和T細(xì)胞的反應(yīng)，特別是對刺突蛋白的反應(yīng)，也包括SARS-CoV-2的核蛋白和膜蛋白，然而，作者決定將分析擴(kuò)展到病毒的整個(gè)蛋白質(zhì)組，SARS-CoV-2會(huì)引起CD8 T細(xì)胞反應(yīng)，值得注意的是，大部分觀察到的CD8 T細(xì)胞反應(yīng)是針對ORF1ab多聚蛋白的，而ORF1ab對CD8 T細(xì)胞的有較高的特異性反應(yīng)。

?

● 實(shí)驗(yàn)對象

為了研究SARS-CoV-2的哪些表位可以被CD8 T細(xì)胞識別，作者收集了22例住院患者的PBMC樣本進(jìn)行分析，其中包括10例重癥患者，9例危重癥，3例已痊愈的。為了在高特異性和高通量的情況下覆蓋盡可能多的HLA等位基因，作者基于肽HLA (pHLA)多路結(jié)合熒光染料的技術(shù)，利用14種不同的熒光染料制作獨(dú)特的雙熒光編碼，可以同時(shí)檢測T細(xì)胞識別的75個(gè)表位。對患者的HLA- A和HLA-B基因位點(diǎn)進(jìn)行分型，篩選出10種HLA等位基因，包括HLA-A*01:01、HLA- A*02:01、HLA- A*03:01、HLA- A*11:01和HLA- A*24:02，以及HLA-B*07:02、HLA-B*08:01、HLA-B* 15:01、HLA-B*18:01和HLA-B*51:01。

?

●?結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：絕大多數(shù)確定的應(yīng)答僅限于HLA-A*01:01等位基因(如下圖)。此外，在5例HLA-A*01:01患者中，有3例患者發(fā)現(xiàn)了額外的應(yīng)答，這些額外應(yīng)答的強(qiáng)度比TTDPSFLGRY表位的應(yīng)答至少低20倍。這一觀察結(jié)果表明，在HLA-A*01:01陽性患者中，該表位很可能驅(qū)動(dòng)CD8 T細(xì)胞對SARS- CoV-2的大部分應(yīng)答，并且很可能是該亞組患者的免疫顯性表位。

?

上圖：所有檢測到的SARS-CoV-2特異性CD8 T細(xì)胞反應(yīng)的Heatmap。每一列代表一個(gè)病人，病人的顏色編碼與疾病狀態(tài)相對應(yīng)?；疑珬l中的黑方塊表示分析中包含的HLA等位基因。左側(cè)列出了T細(xì)胞識別的SARS-CoV-2的表位，顏色編碼顯示了它們來自哪種病毒蛋白。每個(gè)彩色方塊表示檢測到的T細(xì)胞反應(yīng)的大小。

?

上圖：在COVID-143患者中檢測到四種不同的SARS -CoV-2特異性CD8 T細(xì)胞反應(yīng)的流式細(xì)胞儀圖

?

此外，在所有5例HLA-A*01:01陽性患者中均檢測到CD8 T細(xì)胞對ORF1ab表位TTDPSFLGRY的應(yīng)答，這些應(yīng)答的程度明顯高于其他所有檢測到的CD8 T細(xì)胞應(yīng)答?(如下圖)。

?

?

在COVID-19患者中鑒定的9個(gè)CD8 T細(xì)胞識別表位里，其中4個(gè)為SARS-CoV-2特有的表位，5個(gè)為SARS-CoV-2和SARS-CoV共有表位，還有1個(gè)之前已被證明具有免疫原性。值得注意的是，9個(gè)CD8 T細(xì)胞識別的表位中有4個(gè)來自OFR1ab，而CD8 T細(xì)胞識別抗原表位來自S蛋白也有3個(gè)。相比之下，核蛋白和膜蛋白各只有1個(gè)抗原表位。重要的是，CD8 T細(xì)胞對來自ORF1ab的表位的特異性應(yīng)答明顯高于CD8 T細(xì)胞對S、N和M蛋白的應(yīng)答(如下圖)。因?yàn)槟壳按蠖鄶?shù)候選疫苗都聚焦于S蛋白，可能會(huì)導(dǎo)致疫苗研究的局限性，而作者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為設(shè)計(jì)候選疫苗提供了更多的參考。

?

?

隨后，作者發(fā)現(xiàn)CD8 T細(xì)胞識別的SARS-CoV-2表位不在SARS-CoV-2基因組的熱點(diǎn)區(qū)域，從而表明，已鑒定的免疫原性表位被高度保存，使它們成為用于監(jiān)測SARS-CoV-2特異性T細(xì)胞反應(yīng)的有效工具。最后，作者評估了與T細(xì)胞激活和衰竭相關(guān)的4個(gè)抑制受體(NKG2A、PD1、TIM3和2B4)的表達(dá)水平，這些觀察結(jié)果強(qiáng)調(diào)了分析COVID 19患者病毒特異性T細(xì)胞的重要性。

值得注意的是，相當(dāng)一部分鑒定的CD8 T細(xì)胞反應(yīng)是針對ORF1ab的，而且這些反應(yīng)的規(guī)模非常大，與CD8 T細(xì)胞針對刺突、核和膜蛋白結(jié)合的反應(yīng)相比，明顯要高得多。這些結(jié)果顯示ORF1ab表位具有高度的免疫原性。特別是來自ORF1ab的TTDPSFLGRY表位，它是SARS-CoV-2特有的，誘導(dǎo)了CD8 T細(xì)胞的深度反應(yīng)。

?

英國ProImmune公司已合成新冠相關(guān)表位的MHC-I五聚體，特異性的刺激CD8 T細(xì)胞的激活與增殖，協(xié)助新冠疫苗的開發(fā)。

● Here is the catalog of our SARS-CoV-2 specific

● Here is the catalog of our SARS-CoV-2 specific

?

詳情請咨詢?Proimmune 中國授權(quán)代理-欣博盛生物科技?

全國服務(wù)熱線: 4006-800-892 ? ? ??郵箱: market@neobioscience.com?

深圳: 0755-26755892? ? ? ? 北京: 010-88594029 ? ? ? ??上海: 021-34613729???????????

廣州:?18028025014?????????? 香港: 852-69410778?

代理品牌網(wǎng)站: www.nbs-bio.com?

自主品牌網(wǎng)站: www.neobioscience.net